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新型光探针的合成及其细胞内H：O：的检测
缝壶蕉1，唐波p，黄辉1，杨桂文2，李平1陈蓁蓁1
(1山东师范大学化学化工与材料科学学院，济南，250014
2山东师范大学生命科学院，济南，250014)
摘要：建立高选择性、高灵敏度、低毒性检测生物体内活性氧的方法是目前生化分析急
需解决的关键问题。已报道的活性氧荧光检测方法多利用其氧化机理“’，导致选择性差，
ex／x
很难对某一种活性氧准确定量。本文瓤合成的荧光素二对甲基苯磺酸酯(k
用IR、‘HNMR、”CNMR、元素分析对该探针的结构进行了表征；研究了化学环境下该探针
与HzOz的非氧化机理反应，讨论了pH值、H20。浓度、反应温度、反应时问及其他活性氧
对测定反应条件的影响；同时研究了生理环境下(pH=7．4)该探针与巨噬细胞内H20。
的反应，在荧光显微镜下细胞逐渐呈现出强荧光，可用于单细胞内H：02的识别与检测。
结果与讨论
为了建立高选择性、高灵敏度、低毒性检测生物体内活性氧的方法，我们合成了荧
光素二对甲基苯磺酸酯，发现它对Hzoz有极高的选择性和灵敏度。
1． 荧光素二对甲基苯磺酸酯的合成
合成反应后经柱层析分离再重结晶得白色粉末状固体，熔点：88-896C。]R(KBr压片)：
V(cm-1)1771(内酯)，1378(-802一)
2． H。0。的定量检测
曾
lion．nuoreseent fluorescent
1011～2．OOX
实验表明在8．OOX 10—7mol／L范围内，探针对H202响应呈线性关系，检出
限2．63x
10-3mol／L(磷酸缓冲液pH=7．4)。由荧光素标准曲线(荧光强度一浓度)可定量
测定体系中瞰k的含量。其他活性氧与该探针进行平行实验无明显荧光产生。
探针与Hd如反应的最佳时间由下图看出约为40rain：
譬
3
鼍
罨
坤0 5∞ 5勰 S40 湖
V啉幽n掣h《n嘲
图1 反应体系随时间变化的荧光激发和发射光谱
excitationand
Fluorescence emissionofreactionwithdifferenttime
Fig．1 spectra system
3． 巨噬细胞内}{20z检测
该探针的二甲基亚砜溶液能自动透过细胞膜(小鼠腹腔巨噬细胞)，与胞内H20。反应
几分钟后细胞呈现出荧光。
参考文献：
1 P Radzc．BioL
Bezio，ECivoH，．Free M以，，1994，16(4)：509
2．M．Hatsuo。F_Yuka。ct
al，Angew．Chem．int．Ed．，200443：2389
of
NovelFluorescenttodetect in
Probe Peroxidecell
Synthesis Hydrogen
Xu Li
Ke-Hua1，Bo
Tang”，Hui 1，
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