第四章 用18S+rRNA序列探讨8种绿藻分子系统发育.pdfVIP

V01．24 第24卷第1期 大连水产学院学报 No．1 200 OFDALIAN 9年2月 JOURNAL FISHERIESUNIVERSITY Feb．2009 ·研究简报· 用18S rRNA序列探讨8种绿藻分子系统发育 张耀东，沈颂东，林阿朋，张劲 (苏州大学医学部基础医学与生物科学学院，江苏苏州215123) 摘要：测定了宽礁膜Monostromalatissimum、浒苔Enteromorphaprolifera、孔石莼Vivapertusa的18SrRNA基 因序列，并与肠浒苔Eintestinalis、穿孔石莼U乃r淞删口、石莼ulactuca、礁膜胍nitidum和格氏礁膜 Monostroma grevillei5种已知的大型海洋绿藻的同一基因序列合并迸行比较，分析了核苷酸序列差异和碱基 替换特点，并构建系统发生树。结果表明：浒苔与肠浒苔之间的Kimura双参数距离大于浒苔与石莼属3个 物种之间的Kimura双参数距离；用UPGMA法和MP法构建的系统树基本一致，在构建的系统发生树中， 浒苔与石莼属物种聚为一类，表现班与石莼属物种更近的亲缘关系。 关键词：石莼属；浒苔属；礁膜属；18SrRNA；序列变异；系统发育 中图分类号：Q789 文献标志码：A 目前，国外有学者用18SrRNA基因对有关绿prolifera和宽礁膜Monostroma 藻系统学进行研究。如Hayden等…对石莼科各个年下半年采自山东青岛海区。用蒸馏水仔细清洗新 属编码叶绿体RUBISCO大亚基基因和rDNA小亚 鲜藻体，洗去泥沙和其他附着物，然后晾干，一20 基基因的序列进行比较研究，结果表明，石莼属和 ℃下保存，随取随用。 浒苔属是相近的，但不是单一起源的类群。Biota— 1．2 DNA的提取 ster等【2J对浒苔属的两个假定物种进行了序列对比 将冷冻样品进行恢复培养和消毒处理，再切成 nmscoides 研究，建议将同一起源的Entermopha 小的碎片，放入2mol／L的葡萄糖和体积分数为 et (ClementeRubio)Cremades和Enteromorpha l％的海螺酶液中，在25℃下酶解3h。将解离的 clath；rata Roth(Greville)归并成一个种。但国内利 绿藻细胞用筛绢过滤，用离心机沉淀分离细胞和原 用18S rRNA序列进行绿藻系统分析尚未见报道。 生质体。用去离子水反复洗涤离心，以彻底去除酶 大型海洋绿藻主要包括石莼目、礁膜科的礁膜 mL 液。将沉淀转移至1．5mL离心管中，加入500 属Monostroma以及石莼科的石莼属Ulva和浒苔属 mmol／LTris