《牛病毒性腹泻黏膜病诊断技术》送审稿编制说明.PDF

《牛病毒性腹泻/黏膜病诊断技术》 送审稿编制说明 一、工作简况 （一）任务来源 本任务由全国动物卫生标准化技术委员会于2014 年下达计划，任务计划编 号T-326 。本标准系对GB/T 18637-2002 《牛病毒性腹泻/黏膜病诊 断技术》的修订，参照近年来发布的其它相关诊断技术国家标准和初审专家意见 增加了“临床诊断”标准和“综合判定”的内容，并在诊断技术方法上增加了 “实 时荧光RT-PCR 检测方法”和 “BVDV 抗体间接ELISA 试验”。 （二）背景介绍 牛病毒性腹泻（Bovine viral diarrhea ，BVD ）是由牛病毒性腹泻病毒（BVDV ） 引起的，是世界各国奶牛和肉牛群的常发病。本病毒于1946 年首次在美国纽约 州发现，1959 年Gillespie 和Baker 对美国两株病毒（纽约株和印第安纳株）进 行鉴定后认定为同一个型，1960 年Gillespie 等又分离到Oregon 株，1971 年美 国兽医协会将其统一命名为牛病毒性腹泻-黏膜病病毒（简称BVD-MDV ），后来 又定名为牛病毒性腹泻病毒（BVDV ）。该病主要发生于牛，犊牛更为易感。牛 群中的抗体检出率极高，因此可能普遍存在隐性感染。牛病毒性腹泻病毒（BVDV ） 在分类学上属于黄病毒科（Flaviviridae ）瘟病毒属（Pestivirus ），与古典猪瘟病 毒( Classical swine fever virus ，CSFV) 在血清学上发生交叉反应，并能够突破宿 主的特异性发生交叉感染，因此该病毒感染牛的同时还能够感染绵羊、山羊、猪、 鹿及其他反刍动物。长期以来，该病一直严重影响畜牧业的发展。因此，建立一 种准确、快速诊断该病的方法显得极为重要。目前用于诊断BVDV 的方法很多， 如病毒分离、荧光抗体试验、ELISA 、RT-PCR 技术等，在控制和根除BVDV 方 面发挥着越来越重要的作用。 我国现行《牛病毒性腹泻/黏膜病诊断技术》（GB/T 18637-2002 ）系2002 年 2 月19 日由国家质量监督检疫总局批准，2002 年5 月1 日起实施。该标准中所 涉及诊断技术方法均为2002 年之前的BVDV 病原和抗体的常规检测方法，已不 能适应当前及今后一段时期我国牛病毒性腹泻诊断的技术需求。其存在主要缺陷 为：1）随着细胞培养技术的发展，病毒分离培养所采用的玻璃培养瓶、细胞玻 片、林氏管等已经被一次性的细胞培养瓶和不同规格和型号的细胞培养板所替代； 2 ）病毒分离培养所采用的细胞只规定采用原代牛睾丸细胞，增加了原代牛睾丸 细胞本身外源病毒污染的可能，影响诊断的结果和诊断周期；3 ）随着间接免疫 荧光抗体试剂的商品化及细胞培养器皿的改进，荧光抗体诊断技术的操作方法也 取得了较大的简化；4 ）随着分子生物学的发展，牛病毒性腹泻的实时荧光RT-PCR 技术已逐渐成为该病的病原学诊断的重要方法，并广泛应用；5 ）在血清学诊断 中，该标准只规定了一种微量血清中和试验方法，虽是经典的诊断方法之一，但 不符合目前的诊断试剂快速、准确的技术理念，而有关牛病毒性腹泻病毒抗体的 间接酶联免疫吸附试验方法已经十分成熟，为 OIE 推荐的抗体诊断方法之一， 并且有商品化试剂盒供应。 2002 年至今已经十余年，牛病毒性腹泻诊断技术也发展讯速，相应的诊断 方法也日趋科学、快速和准确，诊断技术标准也不断提升和完善。在此期间，我 国也研制和改进了多种牛病毒性腹泻诊断检测技术，适用于不同目的和需求的诊 断检测。本次对牛病毒性腹泻诊断技术的修订，基本原则有三点：一是与国际先 进技术（尤其是 OIE 推荐的诊断方法）保持一致，与国际标准形成衔接，改变 现有国家标准滞后于国际标准的状况；二是将在我国经过多年实践检验证明成熟 可行的诊断方法和操作步骤纳入进来，提高实用性，改变原有标准不适合使用的 状况；三是所包含方法全面系统，内容丰富，能够尽可能的满足今后我国对牛病 毒性腹泻的诊断技术需要。 （三）起草单位 略 （四）主要工作过程 1. 预研阶段 标准立项前，在2013 年农业标准化重要标准体系专项研究项目《牛病毒性 腹泻/粘膜病病毒荧光 RT-PCR 检测方法研究》科研项目的资助下，研制出牛病 毒性腹泻荧光RT-PCR 检测方法和配套