呼吸道九联检简要操作规程.docVIP

呼吸道九联检简要操作规程 一 采血要求 1. 静脉血，指尖血（儿童） 2. 拒收溶血标本。脂血标本不影响检测。 二 所需实验仪器和设备 1. 荧光显微镜 2. 洗盒，湿盒 3. 摇床 4. 15微升和150微升量程的移液器 5. 1000毫升量筒，1000毫升玻璃容器 三 准备工作： 提前30分钟取出试剂盒恢复至室温，同时将试剂②中的成分加入1L蒸馏水，摇匀直至完全融化。 四 试验步骤： 25ul血清+25 ul PBS溶液 ↓ 混匀 取混合后的液体 30ul ↓ 加150ul吸附剂[⑦] ↓混匀，静置1分钟 离心 4000转 10-15分钟 ↓ 在载玻片上每孔加15ul上清液 ↓ 放入湿盒37度温育 60分钟 ↓ 用PBS洗液冲洗载玻片后，浸泡在PBS洗液中并 放在摇床上摇动10分钟，再用蒸馏水冲洗 ↓ 自然晾干或吹干，每孔加入15ul结合物[⑤] ↓ 放入湿盒37度温育30分钟 ↓ 用PBS洗液冲洗载玻片，浸泡在PBS洗液中并 放在摇床上摇动10分钟，再用蒸馏水冲洗 自然晾干或吹干 ↓ 加封闭介质 盖上盖玻片 观察结果 注意事项： 加样时，移液器不要触碰离心管底部的沉淀和九联检包被孔 实验结束后，九联检片子最好在2-3小时内观察，第二天观察不影响结果判断。若需保存，需冷冻避光。 结果判断 第2,5,6,7,8,9包被孔的阳性细胞为荧光均匀分布在包被细胞上，并且为明显的绿色；阳性细胞数占3%以上时，报阳性，其余阴性。 PBS常温放置一星期不影响实验结果，但要保证在此期间不被污染 5. 若实验室没有摇床，洗涤过程中中间换一次PBS，同样能达到洗涤效果， 而不需要震摇 郑州安图绿科生物有限公司