葛根素对人胚肺成纤维细胞增殖及细胞外基质合成的影响　论文.docVIP

　　葛根素对人胚肺成纤维细胞增殖及细胞外基质合成的影响　论文 .freelL浓度的葛根素作用于体外培养的人胚肺成纤维细胞,24～96 h后观察不同浓度的葛根素对成纤维细胞增殖活性及其功能的影响。MTT法观察成纤维细胞的生长活性,天狼猩红染色观察胶原生成情况。流式细胞仪测定细胞周期时相变化。结果 80～400 μg/mL浓度作用下24～72 h范围内,葛根素可剂量和时间依赖性地抑制人胚肺成纤维细胞的增生(P 0.05)。流式细胞仪检测结果发现,随着浓度的增大,G0/G1期细胞百分比逐渐上升,S期细胞百分比逐渐下降,说明细胞阻滞于G0/G1期。结论 葛根素可在一定程度上抑制人胚肺成纤维细胞的增生,并诱导其凋亡,降低胶原的合成,作用呈时间和剂量依赖性。 【关键词】 葛根素 人胚肺成纤维细胞 细胞外基质 Abstract：Objective To investigate the effect of puerarin on proliferation of human embro fibroblast and extracelluar matrix. Method Human embro fibroblasts L puerarin for 24～96 h. The MTT method atrix formation in different time and different dose of pueratin. The cell cycle distribution etric analysis. Result Incubation cells in presence of puerarin of 40～400 μg/mL for 24～72 h could significant inhibit cell proliferation and restrain the collagen synthesis in a dose- and time-dependent manner (P 0.05). After treated ber in G0/G1 phase an embro fibroblast, makes it arrest in G0/G1 phase and restrains the collagen synthesis,.freele-dependent in vitro. Key an embro fibroblast；extracelluar matrix 肺纤维化是以成纤维细胞增殖及大量细胞外基质(ECM)聚集为特征的病变。肺成纤维细胞的过度增生和分泌胶原在肺纤维化形成过程中扮演了重要的角色。因此,寻找有效药物抑制肺成纤维细胞的过渡增生是防治肺纤维化的重要手段之一。本实验观察了葛根素对人胚肺成纤维细胞增殖及ECM的影响。现报道如下。 1 材料与方法 1.1 主要试剂及仪器 人胚肺成纤维细胞MRC-5,中国协和医科大学基础医学院细胞中心；MEM/NEAA培养液,中国协和医科大学基础医学院；胰酶,美国Sigma公司产品；葛根素标准品(分析纯,含量 99%),中国药品生物制品检定所；胎牛血清,Gibco公司产品；噻唑蓝(MTT),北京科海军舟有限公司；0.1%天狼猩红苦味酸染液,北京海德生物公司。生化培养箱，SANYO公司；酶标仪、流式细胞仪,均为美国B.D公司产品。 1.2 葛根素溶液的配制 以少量二甲基亚砜(DMSO)溶解后,加入MEM/NEAA配制成400 μg/mL贮存液,-20 ℃闭光保存,2周内有效。使用时用DMEM/NEAA培养液稀释至所需浓度(DMSO终浓度小于1‰,在本实验条件下1‰DMSO对培养人胚肺成纤维细胞MRC-5无明显影响)。 1.3 细胞的培养 MRC-5细胞生长于含10%FBS、100 μg/mL青霉素、100 μg/mL链霉素的MEM/NEAA培养液中,于37 ℃、5% CO2、饱和湿度的CO2孵育箱中培养,24 h后进入对数生长期,96 h长满瓶底,3～4 d更换1次培养液。 1.4 葛根素对MRC-5增生的影响 采用MTT法检测。取对数生长期的MRC-5细胞胰酶37 ℃消化5 min,以10%胎牛血清的MEM/NEAA培养液制备成1×105/mL细胞悬液,接种于96孔培养液板中,每孔200 μL,置于37 ℃、5% CO2及饱和湿度的培养箱中培养,至细胞长至单层后,分别在细胞中加入不同浓度的葛根素,同时设不加药的阴性对照和只加培养液的空白对照,每组设4个复孔。分别继续培养24、48、72、96 h后,每孔加入20 μL MTT继续培养4 h,弃上清,加入200 μL DMSO,微量震荡10 min,使MTT完全溶解,于自动酶标仪在570