葛根黄酮提取物对HL60细胞增殖和凋亡的影响论文.docVIP

　　葛根黄酮提取物对HL60细胞增殖和凋亡的影响论文 袁怀波，糜漫天，陈宗道，魏兆军 【关键词】 细胞增殖 College of Biotechnology and Food Engineering, Hefei University of Technology, Hefei 230009, China; Department of Nutrition and Food Hygene, 3rd Military and Medical University; College of Food Science, Southan leukaemia cancer cells HL60 line to reveal its probable mechanism. MethodsThe survival and proliferation of HL60 cells ined by MTT.The cellDNA ploidy distribution and apoptotic rate easured by floetry (FCM), and DNA ladder.The differentiation induced potence ined by NBT. The anticancer and apoptosis potence induced by flavonoids detected by TUNEL. ResultsThere orphological change and DNA ladder of apoptosis ain effect ingredient have an leukaemia cancer cells HL60 line through inducing apoptosis. Key sonii Bentn)的肥大块根，在我国除新疆、青海及西藏外遍布全国各地。葛根中除含有约占新鲜葛根19%~20%的葛根淀粉外，主要成分为异黄酮化合物以及少量黄酮类物质，其中大豆甙元、大豆苷、葛根素是葛根的主要活性成分，尤以葛根素含量最高。近年来研究发现葛根黄酮提取物有抗氧化、抑制癌细胞增殖、诱导黑色素瘤和肝癌细胞凋亡等抗肿瘤作用13，但葛根黄酮提取物抗肿瘤的机制及主效成分还未得到揭示。本实验以人白血病HL60细胞为研究对象，研究葛根黄酮提取物抗肿瘤的途径及其抗肿瘤的主效成分，为葛根黄酮提取物开发为抗肿瘤保健食品和药品提供理论依据。 1材料与方法 1.1主要试剂与仪器葛根黄酮提取物（野葛），用乙醇提取，经乙醇沉降、AB8大孔树脂柱层析等得到纯度80％的成品，其中含葛根素25.2％、大豆甙元16.2％、三羟基异黄酮21.9％；葛根素、大豆甙元标准品购自中国药品生物制品检定所；RPMI1640为Hyclone公司产品；TUNEL凋亡检测试剂盒为华美生物工程公司产品；INCO2 108型CO2培养箱（德国）； 流式细胞仪FACS440型（美国）。 1.2细胞培养实验HL60细胞购于中科院上海细胞生物研究所，培养在RPMI1640培养液中，含10%小牛血清，100U/ml青霉素，100μg/ml硫酸链霉素，置于37℃、5% CO2细胞培养箱，常规培养传代。待细胞处于对数生长期时进行实验处理。 1.3细胞实验分组及药物处理实验设对照组（control）和葛根黄酮提取物、葛根素与大豆甙元处理组。用二甲基亚砜（DMSO）分别将葛根黄酮提取物、葛根素、大豆甙元配成100mg/ml、10-2mol/L、10-2mol/L的储存液，使用液用RPMI1640稀释到所需浓度。DMSO在各组培养液中的浓度均≤0.05％。经预实验确定葛根黄酮提取物、葛根素和大豆甙元的处理浓度分别为50μg/ml、30μmol/L、30μmol/L。 1.4MTT比色法HL60细胞以1×105个/ml细胞密度接种于96孔培养板中，每孔200μl，加各处理因素，培养1～3d，收获细胞前4h，每孔加入15μl MTT（5mg/ml），37℃、5% CO2饱和湿度条件下培养4h，去掉培养液，加入200μl异丙醇、二甲基亚砜混合液（1∶1，v/v）。室温30min左右，用酶联仪在492nm处测OD值。 1.5流式细胞仪检测细胞周期相分布及细胞凋亡率葛根黄酮提取物处理HL60细胞2d，收获细胞，70%冷乙醇固定，RNase消化，碘化丙啶（PI）染色，采用流式细胞仪检测细胞周期相分布和细胞凋亡率。 1.6DNA梯形带检测经葛根黄酮提取物、葛根素和大豆甙元处理HL60细胞2d后，收获细胞，加入150μl NP40细胞溶破液（1% NP40，20mmol/L EDTA，50mmol/L Tris·Cl pH 7.5）溶破5h，