植物脱毒技术.ppt

植 物 脱 毒 技 术 * 脱毒：就是采用一定的方法除去植物体内病毒的技术。 无病毒苗：指不含该种植物的主要危害病毒，即经检测主要病毒在植物体内的存在表现阴性反应的苗木。 * 主要内容： 一.病毒在植物体内的危害及分布 二.植物脱毒的意义 三.植物脱毒的原理和方法 四.无病毒苗的利用 * 一.病毒在植物体内的危害及分布 1 危害： 绝大多数植物都可以无性繁殖的, 容易受到多种病原菌的侵染, 体内积累浓度相当高的病毒。由于病毒通过营养体进行传递，在母株内逐代积累，危害日趋严重。 * 病毒危害表现： 组织和细胞病变 新陈代谢等生理机能受到干扰 外观表现不正常状态 由于危害可通过营养体传给后代，病毒对寄主植物可造成毁灭性危害，导致大幅度减产，甚至全株死亡。世界作物生产中，病毒危害程度仅次于真菌。 * * 退化马铃薯生长期间植株变矮，分枝减少，叶片皱缩，生长势衰退，块茎变小，产量明显下降，一年不如一年，最后失去种植价值，这种现象称为马铃薯退化。 * 2 分布 病毒在植物体内的分布具有不均匀性，随植株不同部位和年龄而异。 老叶和成熟组织及器官中病毒含量较高 根尖、茎尖生长点约0.1--1mm区域内，几乎不含病毒。 * 二.植物脱毒的意义 1、能够有效地保持优良品种的特性 2、快速繁殖品种，使优良品种迅速应用 3、生产无病毒种苗，防止品种退化 4、节约耕地，提高农产品的商品率 5、便于运输 * 三.植物脱毒的原理和方法； 1、热处理脱毒法 2、茎尖培养脱毒法 3、抗病毒药剂处理脱毒法 4、低温疗法 * 1、热处理脱毒法 原理： 热处理脱毒是根据病毒与寄生细胞对高温的忍耐程度不同，选择适当的温度和处理时间，植物组织中的很多病毒被部分地或完全地钝化而可控制其的活动，但很少伤害甚至不伤害寄主组织，从而让植物细胞加快生长，超过病毒扩散速度，使生长点附近不带病毒，从而达到脱毒的目的。 主要的影响因素是温度和时间 * 热处理可通过热水浸泡或湿热空气进行。 热水浸泡对休眠芽效果较好，湿热空气对活跃生长的茎尖效果较好，既能消除病毒又能使寄主植物有较高的存活机会。 热空气处理比较容易进行，把旺盛生长的植物移入到1个热疗室中，在35~40℃下处理一段时间即可，处理时间的长短，可由几分钟到数月不等。 热处理的方法有恒温处理和变温处理，处理的材料可以是植株，也可以是接穗。 * 2、茎尖培养脱毒法 茎尖培养脱毒就是采取茎尖分生组织离体培养的方法获取无病毒试管苗。 原理： 植物体内病毒靠维管束系统移动，分生组织中没有维管束存在，病毒只靠胞间连丝移动，速度很慢，难以追上生长活跃的分生组织，所以旺盛生长的根尖、茎尖一般都无病毒或很少有病毒分布。 * 在解剖镜下，用锋利的解剖刀进行迅速准确地茎尖剥离，再利用植物茎尖分生组织进行离体培养，再结合病毒检测，就可以获得无病毒的植株。 主要影响因素就是切取茎尖的大小，一般要求茎尖长度小于1mm。通常切取茎尖越小，脱毒效果越好，但是茎尖培养成活率变低。 * 3、抗病毒药剂处理脱毒法 原理： 抗病毒药剂法，这是一种新的脱毒方法，运用一些抗病药剂的作用影响病毒RNA的复制形成，干扰病毒的正常生长，从而达到除去病毒的目的。 * 常用的抗病毒化学药物有三氮唑核苷（病毒唑），5-二氢尿嘧啶（DHT）和双乙酰-二氢-5-氮尿嘧啶（DA-DHT）。这些药物常常通过直接注射到带病毒的植株上，或者加到植株生长的培养基上。这种方法一般要与茎尖培养相结合应用。经过抗病毒药剂处理的嫩茎，切取茎尖，再进行组织培养，就会提高脱毒率和成活率。 4.低温疗法 低温疗法是基于超低温保存对细胞的选择性破坏的原理,结合组织培养和病毒检测技术达到脱毒目的 原理： 含有病毒的顶端细胞的液泡较大,胞液中含有的水分也较多,在超低温保存过程中易被形成的冰晶破坏致死,而增殖速度较快的分生组织含的水分少,胞质浓,抗冻性强,不宜被冻死。光学显微镜观察显示,液氮中的超低温能杀死含较大液泡的细胞,而保存液泡小的顶端分生组织细胞。这样超低温处理过的植株再生后可能是无病毒的。 * 低温疗法的操作过程 * * 脱毒方法对比 脱毒方法 优点 缺点 热处理脱毒法 方法简单，效果明显 1、具有局限性，不能去除所有病毒 2、极易使植物材料受热枯死，造成损失 茎尖培养脱毒法 脱毒率高，脱毒速度快