最后革兰染色法.pptVIP

(1)先用低倍镜观察，再用高倍镜观察，找出适当的视野。 (2)将高倍镜转出，然后在涂片上加香柏油一滴。 (3)将油镜头浸入油滴中仔细调焦观察细菌的颜色和形态。 三、涂片观察 P3 四 实验完毕后的处理： 1.将浸过油的镜头按照下述方法擦拭干净： a.先用擦镜纸将油镜头上的油擦去。 b.用擦镜纸沾少许二甲苯（?）将镜头擦2-3次。 c.再用干净的擦镜纸将镜头擦2-3次。` ?注意擦镜头时向一个方向擦拭。 2.镜检后的染色玻片用纸将香柏油擦干净。 1.涂片后要注意固定、干燥，以免标本被冲洗掉。 注意事项 2.革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。 ?如果脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌。 ?如果脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性菌。 ?脱色时间的长短受涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影响， 难以严格界定。 4. 选用幼龄的细菌。选用培养16h-24h菌龄的细菌为宜。若菌龄 太老，由于菌体死亡或自溶常使革兰氏阳性菌转呈阴性反应。 3. 染色过程中勿使染色液干涸。用水冲洗后，应吸去玻片上的 残水，以免染色液被稀释而影响染色效果。 金黄色葡萄球菌(10×40) 大肠杆菌(10×40) 染色结果 染色结果 螺形菌Spiral bacterium 革兰染色意义 ★有助于鉴别细菌 ★有助于选择抗菌药物 ★有助于研究细菌的致病性 选择抗菌药物 革兰氏阳性菌：葡萄球菌属（主要是金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌等）、链球菌属（肺炎链球菌、草绿色链球菌、肠球菌等）、白喉杆菌、炭疽杆菌、破伤风杆菌、蜡样芽孢杆菌等，其中，金黄色葡萄球菌、肠球菌等为临床重要等病原菌 革兰氏阳性菌通常对青霉素类、第一（或第二）代头孢菌素等高度敏感 ，青霉素可为化脓性细菌感染可首选药物 。 选择抗菌药物 革兰氏阴性菌：沙门氏菌属、志贺氏菌属（痢疾杆菌等）、嗜血杆菌属（杜克雷嗜血杆菌、流感嗜血杆菌等）、霍乱弧菌等。革兰氏阴性菌在院内感染中的细菌感染中占了大约65%，且大多菌株容易对抗菌药物耐药 革兰氏阴性菌对第三代头孢菌素、氨基糖苷类、抗假单胞菌属的青霉素类、多粘菌素等高度敏感，对头霉素类和第二代头孢菌素也较敏感。例如氟哌酸对革兰染色阴性杆菌有效，如肠道病、腹泻为常用药 。 研究细菌的致病性 革兰阳性菌可产生外毒素致病。 革兰阴性菌主要以内毒素致病。（ LPS作为G-菌内毒素致病 ） 实验思考 1. 为什么革兰氏染色后细菌会分出两种颜色？ 2. 革兰氏染色最关键的是哪一步，此时阳性菌和阴性菌各应该 是哪种颜色，不经过复染这一步能不能区别革兰氏阳性菌和阴性菌？ 3. 固定的目的之一是杀死细菌，这与用自然死亡的菌体进行染色有什么不同? 实验步骤 观看鞭毛、荚膜、芽孢的示范片 绘图、写实验报告 细菌的特殊形态结构观察 细菌的特殊结构 芽胞(nuclear material ornucleoid) 枯草杆菌芽孢的观察 芽孢：休眠体，不利环境下产生，耐受各种极端环境。 细菌的荚膜的观察 荚膜（capsule) 荚膜：多糖，包裹在菌体外围，保护菌体 细菌鞭毛的观察 鞭毛：运动，菌落形态。 本次实验课结束请确保油镜头擦拭干净交作业，值日同学留下下周实验课（细菌的人工培养）再见！ * * * * * * * * * * * * * 微生物学实验 医学微生物教研室 姓名：余春芳 新浪微博：微生物-轻舞飞扬 QQ邮箱：623358585@ 平时成绩 8分 操作考试成绩 12分 说明： 旷课：一次扣2分，四次旷课总成绩不及格； 作业：教师评分C以下一次扣0.5分； 微生物学试验课成绩计算 微生物实验课注意事项 禁止不穿白大衣进入实验室； 禁止在实验室内吃东西、吸烟；不得高声喧哗，随 处走动； 严禁用酒精灯点燃酒精灯； 严禁把实验室内任何物品带出室外； 病原材料污染桌面、地板等或误吸入口，应立即报告教师进行处理； 爱护实验仪器设备，损坏仪器要赔偿； 实验完毕，废弃物放入指定地点，桌面理清洁，洗手后方可离室。值日同学负责打扫实验室，并关好水电、门窗方可离开。 实验一 革兰染色法 了解细菌涂片制作 掌握革兰染色法的原理、方法以及意义 掌握油镜的使用 实验目的要求 细菌形态检查方法 染色标本的检查 常用方法：革兰染色法、抗酸染色法、特殊结构染色法 应用：观察细菌大小、形态、排列、染色性、特殊结构，