利用MicroBCA和QCM对钛薄膜表面固定纤连蛋白的量化研究与对比.pdfVIP

助 锨 材 料 2012年第13期(43)卷 利用 MicroBCA和 QCM 对钛薄膜表面 固定纤连蛋 白的量化研究与对 比 张慧婷 ，周 超 ，罗丽萍 ，李遂焰 ，陈俊英 ，孙 鸿 ，黄 楠 (1．西南交通大学 生命科学与工程学 院，四川 成都 610031； 2．西南交通大学 材料先进技术教育部重点实验室 ，~tJJI成都 610031) 摘 要 ： 采用物理化学稳定性较好 的石英玻璃为基 针对其直接检测生物相容性较好 的纯钛 [9或氧化钛等 底，用非平衡磁控溅射技术 于其表 面沉积 生物相容性 材料表面蛋白的量化研究较少。本文主要在石英基底 良好的钛薄膜 ，然后在钛薄膜表面共价固定纤连蛋 白。 表面沉积纯钛薄膜 ，并在其表面接枝促细胞粘 附生 长 采用傅立 叶红外光谱 (FT—IR)和 x射线光 电子能谱 的细胞外基质蛋 白Fn[一，一定程度上排除基底材料对 (XPS)对各步处理后 的材料表面特征进 行检测和分 试剂造成的干扰 ，以实现 MicroBCA方法在纯钛表面 析。主要研 究了用MicroBCA检测法对样品表面 固定 的应用，并将其与 QCM 的定量检测做 了 比较。此研 的纤连蛋 白的定量表征的可行性 ，并将该结果与用石 究是针对钛和氧化钛薄膜在生物材料领域的广泛应用 英 晶体微天平 (QCM)方法检测获得 的纤连蛋 白量做 及周超l1所做课题的进一步深入。 了对比和深入分析。结果显示，纤连蛋 白可以成功 固 2 实 验 定到钛薄膜表面，MicroBCA检测法和 QCM 法的检测 结果具有一致性 ，样品表面纤连蛋 白的固定量大约在 2．1 实验材料和试剂 767～789ng／cm 。 石英玻璃 (SiO)薄片 (平均直径为 lOmm，平均厚 关键词 ： 钛薄膜 ；纤连蛋白；MicroBCA；QCM；定量 度为 Imm，上海极林特种玻璃厂)、丙酮 、乙醇 、双蒸 中图分类号 ： R318．08 文献标识码 ：A 水、浓硫酸、过氧化氢 、氨丙基三乙氧基硅烷 (APTE， 文章编号 ：1O01—9731(20l2)13—1726-04 Sigma)、人纤维连接蛋 白(Fn，F一2006，Sigma)、1_(3-二 甲氨基丙基)一3一乙基碳二亚胺盐酸盐 ((EDC，Sigma)、 1 引 言 N一羟基硫代琥珀酰亚胺 (NHS，Sigma)、2-码啉乙磺酸 材料表面生物化是近年研究及应用最为广泛的方 (MES，Sigma)、MicroBCA 试 剂 盒 (购 自 Pierce公 法之一 ，主要是将有生理功能的物质如蛋 白质等 固定 司)。 在材料表面 ，形成一个能与生物活体相适应 的过渡 2．2 钛薄膜的制备、活化及 Fn的固定 层l】]。近年来有文献报道 ，蛋 白质在基底界面上 的吸 2．2．1 钛薄膜的制备与活化 附取向及控制其正确的取向是发挥蛋白质生物功能的 石英玻璃经预处理后 ，采用非平衡磁控溅射设备 关键…2]。在不控制情况下，蛋 白质与表面相互作用时， UBMS450于其表面制备钛薄膜 。纯钛靶 (99．9 )作 取向分布是随机的l3]。由于吸附取向的不 同，蛋 白质 为阴极 ，清洗 3min，工件清洗 20min，工作气体为 Ar， 的生物活性表现得大为不 同。控制适 当的蛋 白质取 基体偏压为 I50V，溅射电流为 3A(脉冲)，靶基距为 向，能得到很好 的蛋 白质与底物 的邻近定 向效应[。 95mm，为了增强膜基结合力用