壳寡糖通过降低线粒体膜电位促进A549细胞凋亡.pdfVIP

李 贤 等 ：壳寡糖通过降低线粒体膜 电位促进 A549细胞凋亡 壳寡糖通过降低线粒体膜 电位促进 A549细胞凋亡 李 贤，周长忍，赵名艳，唐敏健，赵要武 (暨南大学 理工学院材料科学与工程系 ，广东 广州 510632) 摘 要 ： 壳寡糖 (chitooligosaccharides，COS)分子量 2 实 验 小，可溶性好 ，具有抗肿瘤等多种生物活性 。以人肺腺 癌 A549细胞 系为研究对 象，探 究 CoS对 A549细胞 2．1 实验材料 线粒体膜 电位 、细胞生长与死亡 的影响。MTT结果表 A549细胞系为本 实验室保存品。PRIM 1640培 明COS浓度越 高，刺激时间越长 ，其对 A549细胞生长 养基 、胰蛋 白酶和胎 牛血清源 于 Gibco公司；壳寡糖 的抑制作用越 明显；流式细胞仪 检测结果显示 ，lnig／ (分子量≤i000)购 自大连 中科格莱克生物科技有限公 mL的COS明显地 降低 了细胞线粒体膜 电位水平 ；活 司；JC_1线粒体膜电位检测试剂盒购于碧云天生物技 死细胞 荧光 染 色实验表 明，CoS组 死亡细胞 比率提 术研究所 。Live—deadcellstainingkit(活死细胞染色 高，与对 照组相 比具有显著性 差异。结果提 示，COS 试剂盒)购于 Abcam公 司。流式细胞仪为 BD公 司产 可 通过 降低 线粒体 的膜 电位 而促进 A549细胞 凋 品 (BDFACSAriaM)。 亡 。 2．2 MTT实验 关键词 ： 壳寡糖 ；线粒体膜 电位 ；A549细胞 系；流 式 细胞培养于 96孔板 内，不同浓度壳寡糖刺激后 ， 细胞术 ；荧光显微镜 每孔加入 MTT试剂 20ffL，培养箱培养 4h后 ，弃去培 中图分类号： O63 文献标识码 ：A 养液 ，加入 120~L的DMSO，震荡 10min，酶标仪读取 文章编号 ：1O01-9731(2011)04—0635—04 490nm处的吸光度 (OD490nm)，用吸光值 A表示。每 组设 6个重复孑L，另设空 白孔调零。 1 引 言 细胞增殖抑制率 一 竖 ×1。。％ 甲壳质 (chitin)主要存在于虾 、蟹 、昆虫等动物 的 外壳中，也存在于真菌和藻类的细胞壁 中，是具有明显 2．3 流式细胞术检测线粒体膜 电位变化 碱性的天然多糖 ，其经过碱处理后部分脱 乙酰化的产 离心收集各组细胞，弃上清 ，用 500~L培养基重 物被称为壳聚糖 口 ]，但 由于 甲壳质和壳聚糖不溶于 悬细胞 ，加入 500ffL的 JC一1工作液 ，细胞培养箱 中 水 ，在开发应用上受到很大限制。壳寡糖 (chitooligo～ 37℃避光孵育 20min，离心 ，弃上清，缓冲液洗涤 2次， saccharide，COS)是甲壳质或壳聚糖部分降解 的产物 ， 再加入缓 冲液 300ffL，重悬 细胞 ，流式细胞 仪上样检 是一类由2～10个氨基葡糖通过 J3—1，4糖苷键连接起 测 。 ． 来的低聚合度的糖类_】]。与壳聚糖相 比，COS相对 2．4 活一死细胞染色检测细胞死亡情况 分子量小、水溶性好，从而具有更优越的生物活性。因 细胞培养于 6孑L板 内，COS刺激 4d后 ，吸弃培养 此，越来越引起人们的重视。cos除具有抗菌[4]、抗 液 ，PBS洗 2遍 ，加 入 1mL