SiRNA高通量筛选.pdfVIP

为什么要做siRNA高通量筛选？ 复杂的信号通路 细胞是个高度复杂，精密调控的系统 后基因组时代的主要任务： 1. 寻找和研究功能重要的基因 2. 研究这些重要功能基因的相互关系 - 这些是开发新型疾病诊断和治疗方法的关键。 为什么要做siRNA高通量筛选？ RNA干扰技术（RNAi技术）使得系统分析基因功能成为可能 小RNA分子 蛋白质 DNA 功能单元 信息储存单元 RNAi技术特点： 人类DNA全序列已知 1. 设计简单； 蛋白质结构不可预测 2.抑制效率70%‐100%； 3.可重复、特异性高 … … 为什么要做siRNA高通量筛选？ 针对特定的细胞行为或疾病模型，能快速发现大量未知的功能基因， 打开了全面了解生命奥秘大门。 单个SiRNA vs 高通量siRNA筛选 单个SiRNA实验 • 数据量少 • 成本高（600‐1000元/gene ） • 目标基因明确下采用 高通量siRNA筛选的优势： • 数据量大，若全基因组筛选，结果全面，所有基因一网打尽。 • 成本大大降低（￥10/gene甚至更低）。 • 瞬时作用，研究时间短，能平行分析成千上万个基因功能。 • 发现未知的新基因功能, 快速鉴定疾病相关基因和新药物靶点。 为什么要做siRNA高通量筛选？ 举例1：全基因组范围寻找已知通路的未知蛋白 A large‐scale RNAi screen in human cells identifies new components of  the p53 pathway Nature, 2004 利用 23,742 shRNAs （针对7,914 个基因），得到 5个跟 p53信号通路相关的蛋白 为什么要做siRNA高通量筛选？ 举例2：查找细菌或病毒感染寄主细胞的关键基 因 发现250的寄主基因与HIV的感染有关。 Genome‐Wide RNAi Screen for Host Factors Required for Intracellular Bacterial  Infection Science, 2005  发现358的寄主基因影响李斯特菌的感染。 —李斯特菌在美国每年约引起2500份病例、500人死亡，其中李斯特菌症是导致 死亡的主要病因，其致死率甚至高过沙门氏菌及肉毒杆菌。 为什么要做siRNA高通量筛选？ 举例3：筛选已知药物的增敏靶点 •发现 87个基因直接调控 紫 杉醇的药效；其中四个基因 的沉默可降低紫杉醇用量1万 倍。 Nature, 2007