杜仲EuCHIT1基因表达载体构建及在大肠杆菌中的表达.pdfVIP

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2017-06-28 发布于湖北
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山地农业生物学报　 35(5):0009~0012,2016 Journal of Mountain Agriculture and Biology ·研究报告 · 杜仲EuCHIT1基因表达载体构建及在大肠杆菌中的表达 1,2 1 1 1,2,3∗ 董　旋 ,丁延庆 ,冉　昕 ,赵德刚 (1.贵州大学农业生物工程研究院/ 生命科学学院,山地植物资源保护与种质创新省部共建教育部重点实验室,贵州贵阳550025;2.绿色农药与农业生物工程国家重点实验室培育基地,贵州贵阳550025; 3.贵州省山地生态与农业生物工程2011协同创新中心,贵州贵阳550025) - - 摘　要:构建了T7启动子驱动杜仲几丁质酶基因EuCHIT1的原核表达载体pET EuCHIT1和pMCSG EuCHIT1, - - 其表达产物分别含6个组氨酸(6His)标签和6个组氨酸连接的麦芽糖结合蛋白(his tag –maltose binding pro- 6 tein,MBP)标签,分别将重组载体遗传转化大肠杆菌细胞BL21 (DE3),在37℃、150 rpm条件下培养至菌液OD - - 值为0.4~0.8后,转到16℃、150 rpm条件下以1mM IPTG诱导培养12 h,表达产物经SDS PAGE分析,pET Eu- - CHIT1/ BL21 (DE3)表达以包涵体形式存在36.03 kD 融合蛋白,pMCSG EuCHIT1/ BL21 (DE3)成功表达可溶形 - 式存在的77.21kD融合蛋白。故可以使用pMCSG EuCHIT1/ BL21(DE3)获得可溶的融合蛋白,为之后的EuCH- IT1的多克隆抗体的制备和及功能研究奠定基础。关键词:杜仲;几丁质酶基因(EuCHIT1);原核表达;可溶性蛋白中图分类号:Q948　　　文献标识码:A - - - 文章编号:1008 0457(2016)05 0009 04　　　　　　国际DOI编码:10．15958/ j．cnki．sdnyswxb．2016．05．002 Construction of Eucommia ulmoides EuCHIT1 gene expression vectors and its expression in Escherichia coli 1,2 1 1 1,2,3∗ - - DONGXuan ,DING Yan qing ,RAN Xin ,ZHAODe gang