毛细管电泳在生物大分子分析中的应用 - 生物在线.docVIP

毛细管电泳在分析中的应用目录蛋白质和多肽 2 分离 2 毛细管区带电泳 2 毛细管胶束电动色谱（MECC） 5 毛细管筛分电泳 5 毛细管等电聚焦（CIEF） 6 毛细管电动色谱（CEC） 8 二维分离 9 检测 10 （1）样品预富集 10 （2）紫外吸收检测 10 （3）荧光 11 （4）其他检测方式 12 （5）质谱检测 12 注释 15 本文对2002年一月到2003年十二月的相关文献进行了综述。在SciFinder中，该时期有关毛细管电泳的文章超过5000篇，同时还有600多篇相关综述。当然，我们没有必要对这么多的文献进行全面的综述。因为在最近的一篇每半年一次的综述中，它仅限于200篇文献。同时也由于这篇最近的综述，我们将主要来回顾毛细管电泳分析生物大分子：蛋白质和多肽、低聚核苷酸、糖以及脂。即使有了这个限制，我们仍需要选择一些具有代表性的文章，而这中间我们很可能会疏漏一些相当重要的工作。 蛋白质和多肽 分离 蛋白质对于细胞结构和功能有着重要的影响，因此需要相应的分析方法来检测蛋白质的表达和修饰以用来解释细胞体制。这项工作并不是微不足道的。样品可能是一个非常复杂的组织匀浆，它可能包括上万个祖坟，而且它的表达水平可能包含组分数的六倍。 以往，蛋白质研究最经常使用的分析方法的一维或者二维凝胶电泳。在二维凝胶电泳中，基于不同蛋白质等电点的不同，等电聚焦电泳被首先用来分离蛋白质。随后出现了基于不同分子量来分离的ISO-DALT凝胶电泳（ISO代表等电点，DALT代表道尔顿，一种分子质量的单位）。接下来，凝胶被染色而产生的斑点，用来解释原始样品中蛋白质的二维色谱行为。为了鉴定蛋白质，首先进行斑点提取和柱内消化，然后再把提取液注入液质联用仪器中进行分析。这种古老的分析方法并不是没有缺陷的，它费时费力，且需要大量的样品。因此人们就对那种可以实现结合、高产量以及自动化的仪器很感兴趣。 对于蛋白质的分析，毛细管电泳提供了不同于ISO-DALT凝胶电泳的另一种不错的分析方法。同时，毛细管电泳还拥有高产量分析以及自动化仪器的优点。它提供了快速、高效和自动化分离蛋白质和多肽的方法。它只需要少量的样品，这一优点对于研究稀少的酶以及抗体就非常的重要。对于蛋白质和多肽的分离分析，有许多种毛细管电泳的模式可供选择。这些模式都有：毛细管区带电泳、毛细管胶束电动色谱、毛细管筛分电泳、毛细管等电聚焦色谱以及毛细管电动色谱。表1列出了不同模式用于蛋白质和多肽分离的一些代表性文献。 毛细管区带电泳 蛋白质既含有正离子又含有负离子功能团。蛋白质中大多数正电荷基团是精氨酸的残基——胍基以及赖氨酸的残基——胺基。少数正电荷基团包括胺基以及组氨酸。由于这些阳离子残基与毛细管壁表面硅羟基负离子的作用，而导致蛋白质在毛细管壁的吸附。这种吸附是人们所不想要的，因为它导致了样品损失，峰型变宽、低分辨率以及长的迁移时间。 一般来说，改变pH值可以完成特征分离以及减少蛋白质与毛细管壁之间的吸附。因为pH值不仅影响电渗流，还影响蛋白质的电荷。毛细管区带电泳中常用的缓冲溶液有醋酸盐、硼酸盐、柠檬酸盐、磷酸盐、硫酸盐以及其他类似此类的盐。高浓度的缓冲溶液可以减少蛋白质吸附，但同时会引起分辨率降低，背景干扰增大等负效应。利用它们低的导电率，还有一些缓冲溶液更经常的用于生物分析中，比如在毛细管区带电泳的模式下分离蛋白质。这些缓冲溶液通常含有胺基，这些胺基会饱和毛细管壁上的那些与蛋白质反应的位点，从而降低蛋白质在毛细管壁的吸附。 在许多情况下，毛细管壁修饰是利用毛细管区带电泳分离蛋白质的一种有效手段。有许多种方法被提出来修饰毛细管内壁的化学性质，包括通过键合或交联高聚物或与阳离子高聚物的物理附着的永久改性，以及吸附表面活性剂或其他化合物或混合试剂的动力学修饰。涂覆的目的就是减少蛋白质与毛细管壁的相互作用，从而有助于毛细管电泳内蛋白质的研究，改变重现性以及长期的稳定性。许多静态修饰只能运行较少的次数，然后质量就会迅速的下降，从而导致以外部重现数据的出现以及运行次数的增加和分析物表征的困难。目前已经有许多静态修饰取得了不同方面的成功。包括用聚乙烯基乙醇（PVA）、聚双甲基丙烯酰胺（PDA）以及甲基纤维素（MC）的修饰。 已经有一种方法用来定量分析毛细管壁的蛋白质吸附。在这个方法里，用荧光标记的蛋白质被注入毛细管内，饱和潜在的吸附位点，然后解吸附，用内标法定量[2]。这种方法，以及其他一些方法已经用来评价许多潜在的动力学修饰方法。比如：单胺（三乙胺、三羟乙基胺、乙胺）、双胺（腐胺、尸胺、溴化十烷基双胺）、寡胺（亚精胺、精胺、四乙烯基戊胺）、高聚物（PVA、PDA、羟基丙基甲基纤维素、羟基乙基纤维素、羟基乙基丙烯酰胺、EOTrol）、表面活性剂（非离子物质、两性离子）、等电位缓冲液（亚胺基双醋酸