核酸的生物合成 - 河北科技大学大学英语精 .ppt

第十四章 核酸和蛋白质的生物合成 第一节　DNA的生物合成 第二节　RNA的生物合成 第三节　蛋白质的生物合成 预备知识 核酸遗传性大分子；蛋白质功能性大分子； 基因(gene)----生命体遗传信息的传递体，是编码生物活性产物（蛋白质或各种RNA）的DNA功能片段，其功能的体现遵循中心法则。 原核生物：每个细胞只有一个染色体. 真核生物：每个细胞含有多条染色体. 染色体以外的遗传因子：包括细菌的质粒,病毒,真核细胞的细胞器中DNA等。 DNA的体外复制：分子克隆。 DNA的双螺旋结构 RNA的结构 蛋白质的结构 遗传中心法则 “转录” 第一节　DNA的生物合成 DNA的复制 　 　　　DNA－－－－－－－－?DNA RNA的逆转录 　　　 　　　 RNA－－－－－－－－－－?DNA） 一、DNA的复制 反应体系 DNA的复制特点 DNA复制过程 1.反应体系　　413页 底物：dNTP(dATP,dGTP,dCTP,dTTP) 模板：单链的DNA母链 引物：寡核苷酸引物（RNA) 酶和蛋白因子 DNA聚合酶（DNA指导的DNA的聚合酶） 另一种DNA聚合酶（切除引物并补上缺口的酶) 引物酶或RNA聚合酶（引发酶） 解螺旋酶 DNA旋转酶（拓扑异构酶） 单链DNA结合蛋白（原核SSB、真核RPA｝ DNA连接酶（ligase) DNA聚合酶催化反应特点 以4种dNTP为底物 反应需要接受DNA模板的指导，不能催化游离的dNTP的聚合。 反应需有引物 3‘－OH的核酸链(RNA片段) 链生长方向　5’ → 3‘ 产物DNA的性质与模板相同 2.DNA的复制特点 复制子 半保留复制 半不连续复制 复制的保真性 ①复制子(Replicon) 复制子:基因组中能单独进行复制的单位。每个起始点到终止点的区域为一个复制子。各复制子发动复制的时间有先有后。 单复制子:　一般原核生物细胞 多复制子：真核生物细胞核DNA。 复制的方向：单向或双向 ②半保留复制 DNA的半保留复制的证明(1) 1958年，Meselson和Stahl用普通培养基（14N）培养15N标记的大肠杆菌。用CsCl密度梯度离心法分析子代和二代DNA而推知。 DNA的半保留复制的证明(2) 1963年由Cairns用3H标记大肠杆菌DNA经过两代之后，用溶菌酶把细胞壁消化掉，使完整的染色体DNA释放出来，铺在一张透析膜上，用感光乳胶片感光，显影后在电子显微镜下观察。 ③半不连续复制 冈崎片段： 1968年 细菌：1Kb-2Kb，相当 于一个顺反子的大小。 真核：100-200bp ④DNA复制的忠实性 聚合酶对dNTP的选择 3‘?5’核酸外切酶活性以及碱基互补配对。 机体内对DNA损伤的修复。 3.DNA复制过程 (1)起始阶段　(2)复制的延伸　(3)复制的终止 DNA复制为什么要用RNA引物？ 从模板复制最初几个核酸时，碱基堆集力和氢键都　较弱，易发生错配。 复制的最初几个核苷酸，没有与模板形成稳定双链，DNA聚合酶的3‘?5校对功能难发挥作用 二、RNA的逆转录（RNA?DNA） 致癌RNA病毒 逆转录酶(reverse transcriptase, RT) 逆转录活性： RNA指导的DNA聚合酶活性。 RNase H 活性：水解RNA/DNA 杂交体上的RNA。 DNA聚合酶活性： DNA指导的DNA聚合酶活性，合成互补DNA没有3`→5`外切酶活性。 cDNA 以mRNA为模板合成出的相应于一定mRNA的互补DNA。可代表某一特定基因。 反转录酶的发现对于遗传工程技术起了很大的推动作用，目前它已成为一种重要的工具酶。用组织细胞提取mRNA并以它为模板，在反转录酶的作用下，合成出互补的DNA(cDNA)，由此可构建出cDNA文库(cDNA library)，从中筛选特异的目的基因，这是在基因工程技术中最常用的获得目的基因的方法。 第三节　 RNA的生物合成和加工 转录——以DNA为模板，按碱基配对原则把DNA的序列信息抄录给RNA，在RNA聚合酶（依赖DNA的RNA聚合酶）的参与下合成RNA链。 复制——以RNA为模板，按碱基配对原则,在RNA复制酶的参与下合成RNA链。 一、在DNA指导下的RNA合成（转录） 底物：NTP（ATP、GTP、CTP、UTP） RNA链生长方向：5’→3’ 不需引物 需DNA模板 需DNA指导的RNA聚合酶（无3‘－5’外切酶活性） 转录过程： 模板识别（真核生物为装配）； 转录的起始； 转录的延伸； 转录终止 转录图示 RNA转录后的加工　473页 原核生物中RNA的加工　主要是rRNA和tRNA的加工 (1)rRNA前体的加工：甲基化修饰；RNaseⅢ切割 (2)tRNA前体的加工：基因成簇或混合