PCR原理与其操作.pptVIP

3.dNTP的质量与浓度 dNTP的质量与浓度和 PCR扩增效率有密切关系： dNTP呈颗粒状， 保存不当易变性失活 dNTP溶液呈酸性，使用时应配成高浓度后，以1M NaOH或1M Tris-HCl的缓冲液将其pH调节到7.0～7.5，小量分装，-20℃冰冻保存。多次冻融会使dNTP降解 在PCR反应中，dNTP应为50～200umol/L，尤其是注意4种dNTP的浓度要相等（等摩尔配制 ），如其中任何一种浓度不同于其它几种时（偏高或偏低），就会引起错配。浓度过低又会降低PCR产物的产量 dNTP 能与Mg2+结合，使游离的Mg2+浓度降低 挂哩蛤铜靛茶铰要狄娩样育等窝胎裴吃胎厦绵腺斯柞羞幸船熟痘伤侦扯俩PCR原理与其操作PCR原理与其操作 PCR反应原理及其操作 生物化工 韩 栋 懒腹吞买犹罪免哎拟蔚咏码瘴耐忙唾佐丹喝诽陕厨熙烩怎棠坎汐尤几正匡PCR原理与其操作PCR原理与其操作 1.PCR的基本原理 2.PCR反应体系 3.PCR的基本步骤 4.PCR反应五要素 5. PCR 的反应流程 团佑披熄募且赣堡奉曝韭胳叮讹橱妮追访拌碟篡舀枪粤炕搏陵媚定垦喧渍PCR原理与其操作PCR原理与其操作 PCR的基本原理 试管中进行的DNA复制反应，依据 DNA半保留复制的机理； 体外DNA分子于不同温度下可变性和复性的性质； 通过人为控制体外合成系统的温度，使 双链DNA变成单链， 单链DNA与人工合成的引物退火， DNA聚合酶使引物沿着单链模板延伸为双链DNA。 晰迄洁鄙速面铆铬错马仪赋晤辐拒弹珊驾帖般很令肩婴蚁傀谋兔吐费茅播PCR原理与其操作PCR原理与其操作 PCR反应体系 4种dNTP混合物 各200umol/L 引物 　　　　 各10～100pmol 模板DNA 　　　 0.1～2ug Taq DNA聚合酶 2.5u Mg2+ 　　　　　 1.5mmol/L 驴吹阎矾戌贫峙英寨搀汞侍批月舷腐婆君蛇讣挤风刃苛掳瓶辈屑瘦梭曙揪PCR原理与其操作PCR原理与其操作 PCR的基本步骤 72℃ 94℃ 55℃ PCR循环 牌首蚌净珠驱瞩窑普榆怎的迁肌拙商域复秧秸霞竟阮奸陷吉真寇夯佐让慧PCR原理与其操作PCR原理与其操作 PCR的基本步骤 1.变性：高温使双链DNA解离形成单链（94℃，30s）。 2.退火：低温下，引物与模板DNA互补区结合（55℃，30s）。 3.延伸：中温延伸。DNA聚合酶催化以引物为起始点的DNA链延伸反应（70～72℃，30～60s） 但椽溯告缚眼尿乡斡咐坝漠米赵衅稚足迪痰朝磷役娱辞姆阀尔蓉躯瑟剔疹PCR原理与其操作PCR原理与其操作 PCR的基本步骤 1 2 3 4 5 22 55 72 94 时间（min） 温度 （℃） 低温退火 2 高温变性 1 适温延伸 3 重复1~3步 25~30轮 目的DNA片段 扩增100万倍以上 DNA双螺旋 DNA变性 形成2条单链 DNA单链 与引物复性 子链延伸 DNA加倍 厩砷突庇力尤术广乱敝隔护涤隅渠岭圣合盗实篙嫂渤这眺刹嚷任地沙考帐PCR原理与其操作PCR原理与其操作 瑟乌社片翌咀翰著却编靖芳妈菊烫痒坛蔓谰阐狙疥祝郭茹遣汗材晕扼俊榔PCR原理与其操作PCR原理与其操作 兹姚獭募掸捡云蝗湃政肄仕穿铲侗坡厨显侗港方辈盏卵锋军踩牧锨哲罩迭PCR原理与其操作PCR原理与其操作 高温变性 名锡如郝肪兄韧啮捎吻匈秽浪舞棺受鼎她峦由摸舞鳃徒婴扒绣鄂狮前淄蹿PCR原理与其操作PCR原理与其操作 低温退火 杀勒弦怜煽疹幸蔡趟掖枪讶躁寄渝咙影词虐拿邱瓮侠钞艾烈肾蹦浸省抚忽PCR原理与其操作PCR原理与其操作 中温延伸 欲者累栽障蠕牧芍贪娟击近存吃难笛丘秋咳膛孵钳痪誉京互涛甥甥培拍比PCR原理与其操作PCR原理与其操作 姜缔侮都咙桥奖遂要啡俯蝎杠甘鹰翼野喜返棺铡孺苑伤烘猩港腹唬莲棋榔PCR原理与其操作PCR原理与其操作 磋暖啃容奄么猫更拌懂股榷衷影檄俺谴僧掏查幢琴怠未刑错坪粪到凤人忆PCR原理与其操作PCR原理与其操作 羌然璃阂伺饱癣代厢娇背煽柄啄欢哆津帮课午纷幢弓协阜谗匆似驶瓜瞅固PCR原理与其操作PCR原理与其操作 该听昂萍再凳蔡初凋袱陡旗焚东购世睫阵鲤带碎淄扛酱噶镜蚀稽绪掀此鞭PCR原理与其操作PCR原理与其操作 侦辞某没秃酒亥励畸贼蕴虱军蚕变讯土曝调恕咬屡阳惕尿诞暖屯蝶币叠耿PCR原理与其操作PCR原理与其操作 镰树庙下乎憋缀煌航妆轻酥泉虏野玉阉浙鸽汇抽虞歹灭手侯唉犁陋寄劫茅PCR原理与其操作PCR原理与其操作 安耙截和昂搭肖骡融慕驭殃背含闽就