冰冻切片制作及质量控制.pptxVIP

云南省肿瘤肿瘤医院病理科 李 磊 浅谈冰冻切片的体会 影响术中病理诊断准确性的因素 如何提高冰冻切片的质量 技术员 包埋 相互沟通理解 取材医生 临床医生 技术员 诊断医生 送检组织宜新鲜、及时并避免遇水 取材器械保持干燥、清洁 组织本身含水较多则可用滤纸吸干 避免不必要的脂肪附着 通过申请单的病史及所取组织有初步认知程度 小结： 以上诸多要求，其实我们最主要的目的就是从根源上控制冰晶的产生，因为冰晶会导致细胞间针状裂隙，细胞结构改变，细胞核普遍增大，影响诊断准确性。 冰冻组织的包埋 包埋组织时应将组织周边多留出 O. C. T . 用于 牵引展开切片之用,否则出刀、 入刀处会有皱褶影响 制片效果。O. C. T . 中的小气泡应尽量去除, 以免影 响旁边组织产生挤压和皱褶。较小的组织在包埋时 可以先制作一个 O. C. T . 冻托, 待冻托基本凝固时, 将组织放在冻托上,再在周围放上 O. C. T . 后速冻。 囊壁类组织需要立埋时, 可将几条囊壁紧靠一起卷 成 U字形,可以帮助囊壁更好保持侧立。OCT的放置 不宜过多，太多了影响速冻时间产生冰晶。 包埋 如何才能保证速冻？尽量减少冰晶的产生 当然是为了减少冰产生 冻锤的使用 半导体制冷 液氮 冻锤的使用 在组织冷冻过程中,组织内可产生大量的冰晶影响冰冻切片的诊断,为了防止组织内冰晶的产生最好的办法是使用冻锤。新鲜标本包埋后放入冷冻台时,不能将冻锤马上按压在组织上,那样会使组织 受挤压变形。应该待 O. C. T. 60 % ~ 70 %凝固时 再将冻锤轻压在组织上,这样既能防止冰晶的产生 又能得到较平整的切面。 温度过低 组织过硬 温度过高 硬度不够 小结： 组织冻结后将组织连同样本托固定到冷冻头 上,设定切片厚度 4um。用样品快进按钮 将样品移 近刀口,调整要切的平面, 利用慢进按钮 先粗切修出 组织最完整切面后细切 1~ 2张弃用,继续细切时左 手持毛笔轻拉 O. C. T. 边缘,右手切片,双手匀速配 合。待组织切片完整拉下铺于组织样品上, （也可以使用废 片轻轻拖至切片刀刃上，右手半切组织过程中，顺势将废弃组织与待切组织片粘连，轻轻向后拉动，当组织切到位点以后，就形成一张完整的切片）再用常温载玻 片粘贴后迅速放入乙醚酒精混合固定液中中固定2分钟左右。 切片注意事项 1、样本托放入机头时，必须根据组织的结构及走势来放置。 2、较硬的组织切片时，组织表面呈胶冻状时，将其修切去，因为冷冻是自下而上，表面呈胶冻状时(例如内膜癌的子宫肌壁带全层)，下面组织已符合切片最佳时机。 3、组织过冻时，可带上薄膜手套用拇指置于组织块表面几秒钟。 4、组织有部分不需要或阻碍我们获得高质量切片时，可将其挖除。 5、切片时，注意观察组织表面有无包膜，结节，但修片时也必须注意观察重点病变的微小病灶避免修切过度，造成误诊，漏诊，切片厚度4~5um，淋巴结切片 3 um 为宜。 冷冻常见问题及对策 1、取材常见问题及对策 1.1取材常见问题及对策 组织被挤压:取材刀剪必须锋利， 切割时不可来回锉动 夹取组织时切勿猛压， 以免挤压损伤组织。 1.2组织块过大:冷冻时间延长易产生冰晶，在不影响病理诊断的前提下， 标本取材尽量小一些 切片后用载玻片贴片时手不能颤抖,而且在贴附组织时手要有一个向下伸展的动作, 切片机的盖打开越小越好。 2.组织贴附不平或有皱褶: 常见于组织结构软硬不同的组织, 解决方法:标本较硬的部分摆在上端, 先切较软的部分, 依次切到硬的部分,同时用毛笔轻轻地展开, 或用抗卷板才能切出完整的切片。 3.组织挤压、 皱缩: 4.组织破碎 组织破碎: 如果组织冰冻过头,使之发脆就会发生破碎,这时用手贴在组织上片刻稍加温使其软化即可切出完整的切片。 5脱片 冰冻切片一般很少脱片, 偶尔见于坏死组织或纤维较多的组织，或者载玻片不清洁 切片太厚或组织本身的原因。 解决方法: 将组织切片切得更薄2-3um,切片固定后用吹风机吹干或用防脱片贴片后染色，染色时轻拿轻放，防止人为脱片。 6冷冻欠佳致切片困难: 不易成形，产生搓板状 ，厚薄不均 破碎或糊糊状:组织冷冻时间不够或冷冻机内设定的温度未达到要求 可延长冷冻时间或调低冷冻机冷冻温度 若为刀片的温度不够冷，要预冷刀片