人钙联蛋白（calnexin）酶联免疫分析试剂盒使用说明书.PDF

人钙联蛋白(calnexin)酶联免疫分析 试剂盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用。 药品名称： 通用名：人钙联蛋白(calnexin)酶联免疫分析试剂盒 使用目的： 本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中钙联蛋白(calnexin)含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人钙联蛋白(calnexin)水平。用纯化的人钙联蛋 白(calnexin)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入组钙联蛋白 (calnexin)，再与HRP 标记的钙联蛋白(calnexin)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物， 经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下 转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的钙联蛋白(calnexin)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人钙联蛋白(calnexin)浓度。 试剂盒组成 1 30 倍浓缩洗涤液 20ml ×1 瓶 7 终止液 6ml ×1 瓶 2 酶标试剂 6ml ×1 瓶 8 标准品（720ng/L） 0.5ml ×1 瓶 3 酶标包被板 12 孔×8 条 9 标准品稀释液 1.5ml×1 瓶 4 样品稀释液 6ml ×1 瓶 10 说明书 1 份 5 显色剂A 液 6ml ×1 瓶 11 封板膜 2 张 6 显色剂B 液 6ml ×1/瓶 12 密封袋 1 个 标本要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能 马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP ）活性。 操作步骤 1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10 孔，在第一、第二孔中分别加标 准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二 孔中各取100μl 分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl， 混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl 弃掉，再各取50μl 分别加到第五、第六孔 中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各 取50μl 分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混 匀后从第七、第八孔中分别取 50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准 品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl 弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl， 浓度分别为480ng/L，320ng/L ，160ng/L，80ng/L， 40ng/L ）。 2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样 品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl （样 品最终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混 匀。 3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。 4. 配液：将20 倍浓缩洗涤液用蒸馏水20 倍稀释后备用 5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此 重复5 次，拍干。 6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 7. 温育：操作同3 。 8. 洗涤：操作同5。 9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 15分钟. 10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止 液后15 分钟以内进行。