激发光谱与荧光光谱.pptVIP

荧 光 光 度 计 掌握分子荧光产生的过程及其影响因素 熟悉荧光光度计的基本构件及操作程序 了解荧光分析法的特点与应用 1. 分子能级与跃迁 分子能级比原子能级复杂； 在每个电子能级上，都存在振动、转动能级； 基态(S0)→激发态(S1、S2、激发态振动能级)：吸收特定 频率的辐射；量子化；跃迁一次到位； 激发态→基态：多种途径和方式(见能级图)；速度最快、激发态寿命最短的途径占优势； 第一、第二、…电子激发单重态 S1 、S2… ； 第一、第二、…电子激发三重态 T1 、 T2 … ； 2.电子激发态的多重度 3.激发态→基态的能量传递途径 二、激发光谱与荧光光谱 2.荧光光谱(或磷光光谱) 3.激发光谱与发射光谱的关系 镜像规则的解释 三、荧光的产生与分子结构的关系 2.化合物的结构与荧光 四、影响荧光强度的因素 4.内滤光作用和自吸现象 5.溶液荧光的猝灭 二、仪器结构流程 仪器光路图 同步扫描技术 可获得三维光谱图的仪器 开机顺序： 开机前首先确认主机两个开关：POWER/MAIN均处于关闭状态（搬向O处）。 先接通电源开关（POWER）， 5秒钟后再按下氙灯点灯按钮，当氙灯点燃后，再接通主开关（MAIN）。此时主开关上方绿色指示灯连续闪动三下。 接通电脑及打印机电源，Win98开始建立，随后F-4500操作界面自动进入。 按界面提示选择操作方式。 关机顺序： 逆开机顺序实施操作。 当电源开关关闭后5秒钟，再次接通10分钟。（目的是仅让风扇工作，使灯室散热）最后关闭电源开关。 三、荧光分析方法与应用 2.定量依据与方法 （2）定量方法 3.荧光分析法的应用 测 试 题 1.简述荧光产生过程。 2.荧光仪是由哪几部分组成？ 3.简述日立F-4500荧光分光光度计开关机的顺序。 4.荧光分析法的应用有哪些方面。 5.荧光分析的特点有哪些？ (1)定量依据 荧光强度 If正比于吸收的光量Ia和荧光量子效率? ： If = ? Ia 由朗-比耳定律： Ia = I0(1-10-? l c ) If = ? I0(1-10-? l c ) = ? I0(1-e-2.3? l c ) 浓度很低时，将括号项近似处理后： If = 2.3 ? I0 ? l c = Kc 标准曲线法： 配制一系列标准浓度试样测定荧光强度，绘制标准曲线，再在相同条件下测量未知试样的荧光强度，在标准曲线上求出浓度； 比较法： 在线性范围内，测定标样和试样的荧光强度，比较； (1)无机化合物的分析 与有机试剂配合物后测量；可测量约60多种元素。 铍、铝、硼、镓、硒、镁、稀土常采用荧光分析法； 氟、硫、铁、银、钴、镍采用荧光熄灭法测定； 铜、铍、铁、钴、锇及过氧化氢采用催化荧光法测定； 铬、铌、铀、碲采用低温荧光法测定； 铈、铕、锑、钒、铀采用固体荧光法测定 (2)生物与有机化合物的分析 见表 * * * * * * * 环境科学与工程研究中心 【实验目的】 【实验原理】 一、分子荧光产生过程 二、激发光谱与荧光光谱 三、荧光的产生与分子结构关系 四、影响荧光强度的因素 一、分子荧光的产生过程 电子激发态的多重度：M=2S+1 S为电子自旋量子数的代数和(0或1)； 平行自旋比成对自旋稳定(洪特规则)，三重态能级比相应单重态能级低； 大多数有机分子的基态处于单重态； S0→T1 禁阻跃迁； 通过其他途径进入 (见能级图)；进入的几率小； （S0：单线基态；S1：最低激发单线态；T1：最低激发三线态；A： 吸收；F： 荧光；P：磷光；v：振动驰豫；ISC：系间窜跃） 荧光、磷光光物理过程示意图 电子处于激发态是不稳定状态，返回基态时，通过辐射跃迁(发光)和无辐射跃迁等方式失去能量。 传递途径 辐射跃迁 荧光 延迟荧光 磷光 内转移 外转移 系间跨越 振动弛豫 无辐射跃迁 激发态停留时间短、返回速度快的途径，发生的几率大，发光强度相对大。 荧光：10-7～10 -9 s,第一激发单重态的最低振动能级→基态； 磷光：10-4～10s；第一激发三重态的最低振动能级→基态； 荧光：光致发光，照射光波长如何选择？ 1.荧光(磷光)的激发光谱曲线 固定测量波长(选最大发射波长),化合物发射的荧光强度与照射光波长的关系曲线 （图中曲线I ） 。 激发光谱曲线的最高