森林培育学实验之一.docVIP

实验一 植物细胞染色体制片与组型分析 学习和掌握植物染色体组型分析的基本方法 二、实验材料： 马尾松种子、大豆 三、实验仪器、药品 显微镜、测微尺、载玻片、量筒、温度计、恒温箱、水浴锅、冰箱、解剖针、刀、镊子、培养皿、滤纸、烧杯、直尺、圆规、铅笔、绘图纸、显微显影设备、印相设备。 秋水仙碱、冰醋酸、95%酒精、浓盐酸（36%－38%）、石炭酸品红、二甲苯、加拿大树胶、8－羟基喹啉、对二氯苯 四、实验说明： 二倍体植物是配子所具有的全套染色体称为一个染色体组。而染色体组型是指染色体组在有丝分裂中期的表现，包括染色体的数目、长度、着丝粒的位置、出厂价格与副缢痕的数目、大小、位置以及异染色质在染色体上的分布等特征。通过一定的方法进行观察和分析，对这些特征进行描述，就是染色体组型分析。因此，组型也叫核型，所以染色体组型分析也称核型分析。将一个染色体组的全部染色体逐条按其特征画下来，再按长短、形状等特征排列起来的图，即核型模式图。 每一物种都有其特定的染色体组型，组型分析对于细胞遗传学、细胞分类学、杂交育种及遗传工程都是十分基本而必要的工作，同时在物种进化的研究中也具有参考价值。 五、实验步骤 （一）　染色体玻片标本的制作 1、将种子用水浸泡24小时，然后置于培养皿中在25℃左右的恒温箱中发芽。 2、预处理：当胚根长到1cm左右时，切下根尖并将其转入置有0.05%秋水仙碱溶液或饱和对二氯苯的溶液中，处理2－3小时， 3、固定：材料经水洗2－3次后，用卡诺固定液固定12－24小时，一般固定液用量为材料体积的15倍以上。 4、解离：固定后的材料经95%、70%和50%酒精至蒸馏水洗涤后，转入0.2NHCl中，在60℃恒温条件下，处理5－10分钟（一般以8分钟为最佳）。 5、软化：解离后的材料用蒸馏水洗涤三次，每次5分钟，然后转入36%醋酸中软化0.5-1.5小时。 6、压片：取根长约2mm的根尖置于载玻片上，用解剖针搞碎，加半滴石炭酸品红染色液，约过2-3分钟，按常规方法压片。 7、镜检：置显微镜下，选择染色体分散良好的制片。用加拿大树胶封片。 （二）染色体组型分析 1、在低倍显微镜下，选取染色体分散良好的一定数量（100个）中的中期分裂相，分别进行染色体计数，确定研究对象的染色体数目，并记录使用的显微镜号以及移动尺的座标，以备校对。 2、从上述中期分裂相中，选择一定数目（5－10）个染色体数目完整，收缩适度，各对染色体较平直和着丝点小青蛙析分裂相进行显微摄影，取清晰的底片，放大成照片，每个比细胞至少5张。 3、在显微镜下和放大照片上，对染色体依次进行测量和描述。以微米记下绝对长度（一般不计着丝点部分的长度，随体长度可计入）。同时计算出每条染色体的相长度，臂比等。 4、配对：根据染色体的绝对长度、臂比、主缢良和随体的有无和位置形态大小，进行染色体的剪贴，配对。 5、排列：通常从大到小进行排列，按长度顺序编号，等长的染色体以短臂长的在前，有特殊标记的如（有出厂价格的）多数排在最后，（如果出厂价格的长度计入总长度中，则不必放在最后），性染色体也应单独列出。 以臂比数值确定着丝点的位置，并以此进行分类（见表1） 6、绘制染色体核型图，并最终绘制其核型模式图。 表1　臂比的染色体分类 臂比数值 染色体类型 符号 1 正中部着丝粒染色体 M 1.0-1.7 中部着丝粒染色体 m 1.7-3.0 近中着丝粒染色体 Sm 3.0-7 近端着丝粒染色体 st ＞7 端部着丝粒染色体 t ∞ 具随体染色体 sat 计算公式： 染色体组平均长度＝染色体相对长度＝? 臂比＝? TF值＝ ? 注： （1）1者为长染色体，以A表示，在0.7-1.0之间为中长染色体，用B表示，小于0.7者为短染色体，用C表示， （2）Aparna DasuptaR.P.Bhaht认为TF值为50时，核型为绝对对称，在50-42.75之间为对称，36.89-42.75之间为近对称，小于36.89为不对称。 六、作业 1、将所测的染色体各项数据汇总于表2和表3 表2　 染色体编号 绝对长度（u) 相对长度（%） 短臂（u) 长臂（u) 臂比 随体 染色体类型 1 2 3 4 合计 染色体编号 绝对长度（u) 相对长度（%） 短臂（u) 长臂（u) 臂比 随体 染色体类型 1 2 3 4 合计 ?表3　 2、绘制染色体组型模式图，并写