牛乳铁蛋白单克隆抗体的制备及双抗夹心ELISA检测方法的建立_项开合.pdfVIP

34 中国兽医杂志 2014年（第50卷）第10期 Chinese Journal of Veterinary Medicine 牛乳铁蛋白单克隆抗体的制备 及双抗夹心 ELISA 检测方法的建立 项开合 ，张乃生1 2 （1.辽东学院农学院，辽宁丹东 118000；2.吉林大学动物医学学院，吉林 长春 130062） 摘要：本试验以牛乳铁蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠，应用淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体，获得了3株稳定分泌乳 铁蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为3C6、3F8和4D3，最后用相对亲和力最强的3C6所产生的抗体作为包被抗 体，用辣根过氧化物酶标记过的多克隆抗体作为酶标抗体，最终建立了用于检测牛乳汁中乳铁蛋白含量的双抗夹心ELISA检 测方法，该法对牛乳铁蛋白最低检测限为4ng/mL，最适检测范围为4～256ng/mL。 关键词：乳铁蛋白；单克隆抗体；多克隆抗体；双抗夹心ELISA检测方法 中图分类号：S854.43 文献标志码：A 文章编号：0529-6005（2014）10-0034-03 PreparationofAnti-bovineLactoferrinMonoclonalAntibodiesand DevelopmentofSandwichELISAfortheDetectionofBovineLactoferrin XIANGKai-he ，ZHANGNai-sheng1 2 （1.CollegeofAgriculture，EasternLiaoningUniversity，Dandong118000，China； 2.CollegeofVeterinaryMedicine，JilinUniversity，Changchun130062，China） Abstract:ThisstudywasaimedtoestablishdoubleantibodysandwichELISAmethodfordetectionofbovinelactoferrin（LF）. UsingbovinelactoferrinasantigentoimmunizeBALB/cmiceandbylymphocytehybridomatechnique，monoclonalantibodies （McAb）againstbovineLFwereobtained.Threestrainsofhybridomacellswereestablishedandnamed3C6，3F8and4D3.Withpuri⁃ fiedmouseanti-bovineMcAbagainstLFwhichhavethehighestaffinityandgeneratedby3C6asacoatedantibody，andrabbitHRP- labeledPcAbasaseconddetectionantibody，doubleantibodysandwichELISAwasestablishedfordetectionofbovineLFinmilk. ThelowestdetectablelimitofELISAwas4ng/mL.Therangeofdetectionwas4～256ng/mL. Keywords:Lactoferrin ；MonoclonalAntibody ；PolyclonalAntibody ；SandwichELISA Correspondingauthor：ZHANGNai-sheng [1] 奶牛乳腺炎是影响世界乳牛业发展最主要的 的各种外分泌物中，如乳汁、眼泪、唾液等 。研究 疾病之一，特别是奶牛隐性乳腺炎，发病率高，不 发现，当奶牛患乳腺炎时，牛乳中LF含量与炎