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中华人民共和国国家标准 农业部XXXX公告—X—XXXX 转基因生物及其产品食用安全检测 外源基因异源表达蛋白质等同性分析导则 Food safety detection of genetically modified organisms and derived products—The guideline for equivalence analysis of foreign proteins derived from different organisms (报批稿) 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由全国农业转基因生物安全管理标准化技术委员会（SAC/TC 276）归口。 本标准起草单位：农业部科技发展中心、中国农业大学。 本标准主要起草人：黄昆仑、刘信、贺晓云、许文涛、沈平、罗云波、车会莲、李欣。 转基因生物及其产品食用安全检测 外源基因异源表达蛋白质等同性分析导则 1 范围 本标准规定了同一个基因在不同转基因生物中表达的蛋白质的等同性分析导则。 本标准适用于分析比较同一个基因在不同生物中表达蛋白质的等同性 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2.1 蛋白质等同性 equivalence of protein 同一基因在不同生物体内表达的蛋白质在结构、理化特性、生物活性等方面的一致性。 2.2 免疫原性 immunogenicity 蛋白质与抗体（单克隆或多克隆）发生抗原抗体结合反应的能力。post-translational modification 蛋白质多肽链在核糖体装配期间和装配之后的共价修饰，磷酸化糖基化蛋白质的氨基酸的排列顺序。 分析原则 对外源基因在不同生物中表达的蛋白质进行等同性分析时，从结构、理化特性和生物活性等多方面对两种来源的蛋白质的等同性进行分析。 4 分析指标 4.1 理化特性 4.1.1 表观分子质量 4.1.1.1 分析方法主要有十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳，十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳是在样品介质和聚丙烯酰胺凝胶中加入离子去污剂和强还原剂，蛋白质亚基的电泳迁移率主要取决于亚基分子量的大小，而与电荷无关。当蛋白质的分子量在15 D到200 D之间时，电泳迁移率与分子量的对数呈线性关系，测定蛋白质亚基的分子量。 质谱是用电场和磁场将运动的离子（带电荷的原子、分子或分子碎片）按它们的质荷比分离后进行检测，根据分子离子峰质荷比可确定分子量。 4.1.2 免疫原性 4.1.2.1 分析方法有蛋白印迹，酶联免疫等。蛋白印迹是先将蛋白通过SDS电泳分离，再利用电场力的作用将胶上的蛋白转移到固相载体（常用硝酸纤维素膜）上，然后加抗体形成抗原抗体复合物，利用发光或显色方法将结果显示到膜或底片上，酶联免疫吸附试验是先将抗原或抗体包被于固相载体的表面，与待检样品中的相应抗体或抗原发生反应，再加入酶标记抗体或抗原与免疫复合物结合，最后加入酶的作用底物，产物颜色的深浅或测定其值，。 分析方法主要有过碘酸-Shiff反应检测过碘酸-Shiff反应是过碘酸将糖中的乙二醇基氧化为乙二醛基，后者再与Schiff试剂中的亚硫酸品红反应，形成紫红色不溶性反应产物，沉积于多糖存在的部位 4.2 一级结构 4.2.1 分析方法有N端C端测序，。氨基酸测序分为N端测序和C端测序，是用将从一端依次切下，并在时间内检测切下的氨基酸的种类，测定N端或C端的氨基酸序列。肽质量指纹谱是蛋白质被识别特异酶切位点的蛋白酶水解后得到的肽片段的质量图谱。采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）测得肽质量指纹谱。 5 分析指标选择 5.1 测定外源基因在两种生物中表达的蛋白质的分子量，且与预测分子量进行比较。如果测定值与预测值不符，可根据需要进行翻译后修饰分析；如果测定值与预测值相符，则按5.2~5.4进行进一步分析。 5.2 对两种来源的蛋白质进行一级结构鉴定，并与预测的氨基酸序列进行比较。如果该外源蛋白质已经进行了充分的研究，具有完善的背景资料，可以不做原转基因生物中表达的蛋白质的一级结构鉴定。 5.3 当有适用的抗体或免疫检测方法时，要对两种来源的蛋白质进行免疫原性测定。 5.4 已知外源蛋白质具有某种特定的生物活性时，要对两种来源的蛋白质进行生物活性分析。 6 结果判断 如果两种来源的蛋白在理化特性、一级结构、生物活性等方面均表现出一致性，则认为这两种蛋白具有等同性；如果分析指标中出现差异，则具体情况具体分析。 2 农业部XXXX号公告-X-XXXX I 农业部XXXX号公告-X-XXXX 农业部XXXX号公告