猪卵母细胞极体排出规律.doc

猪卵母细胞极体排出规律摘要：试验把猪卵丘－卵母细胞复合体（Ｃｕｍｕｌｕｓ－ｏｏｃｙｔｅ ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ，ＣＯＣｓ）于体外分别培养２４、３２、３８、４４、４８和５４ ｈ，观察它们在不同时间排出的极体数，以研究体外卵母细胞排出极体的规律。结果表明，Ａ级和Ｂ级的ＣＯＣｓ培养４８ ｈ的极体排出率最高 （８３．２％和65.7％），明显高于同级水平培养２４、３２和３８ ｈ的；不同级别ＣＯＣｓ体外培养相同时间后，Ａ级与Ｂ级的极体排出率差异不显著（Ｐ?０．０５），但两者与Ｃ级的差异显著 （Ｐ?０．０５）。由此可见，Ａ级、Ｂ级ＣＯＣｓ 能获得高的极体排出率，培养４８ ｈ的极体排出达到高峰，排出过程呈现前期上升快、后期下降慢的变化趋势 关键词：猪；卵丘－卵母细胞复合体；体外成熟；极体 中图分类号：Ｓ８２８；Ｓ８１４．８ 文献标识码：Ａ 文章编号：0439－８114（２０11）24－5172-03 Ｔｈｅ Ｒｕｌｅ ｏｆ Ｐｏｌａｒ Ｂｏｄｙ Ｒｅｌｅａｓｅ ｏｆ Ｐｉｇ Ｏｏｃｙｔｅｓ ｉｎ Ｖｉｔｒｏ ＬＩＵ Ｘｉ－ｍｅｉ１，ＨＵＡ Ｚａｉ－ｄｏｎｇ２，ＷＥＩ Ｑｉｎｇ－ｘｉｎ１，ＱＩＡＯ Ｘｉａｎ－ｆｅｎｇ１，ＬＩ Ｌｉ１，ＸＩＡＯ Ｈｏｎｇ－ｗｅｉ１ （１ Ｈｕｂｅｉ Ｋｅｙ Ｌａｂ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｅｍｂｒｙｏ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｒｅｅｄｉｎｇ， Ｈｕｂｅｉ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ Ｓｃｉｅｎｃｅs， Ｗｕｈａｎ ４３００６４， Ｃｈｉｎａ； ２． Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ， Ｇｕｉｚｈｏｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｇｕｉｙａｎｇ ５５００２５， Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ｐｏｌａｒ ｂｏｄｙ ｅｘｔｒｕｄｅｄ ｆｒｏｍ ｐｉｇ ｃｕｍｕｌｕｓ－ｏｏｃｙｔｅ ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ （ＣＯＣｓ） ａｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｕｌｔｕｒｅ ｔｉｍｅ ｉｎ ｖｉｔｒｏ， ｓｕｃｈ ａｓ ２４ ｈ， ３２ ｈ， ３８ ｈ， ４４ ｈ， ４８ ｈ ａｎｄ ５４ ｈ， ｗｅｒｅ ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｒｕｌｅ ｏｆ ｐｏｌａｒ ｂｏｄｙ ｒｅｌｅａｓｅ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｅｘｔｒｕｄｉｎｇ ｒａｔｅ ｏｆ ｐｏｌａｒ ｂｏｄｙ ｆｒｏｍ ＣＯＣｓ ｏｆ ｌｅｖｅｌｓ Ａ ａｎｄ Ｂ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｆｏｒ ４８ｈ ｗｅｒｅ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ （８３．２％ ａｎｄ 65.7％）， ａｎｄ ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｌｅｖｅｌ ＣＯＣｓ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｆｏｒ ２４ ｈ， ３２ ｈ ａｎｄ ３８ ｈ． Ｔｈｅ ｐｏｌａｒ ｒａｔｅ ｏｆ ＣＯＣｓ ｏｆ ｌｅｖｅｌ Ａ ａｎｄ Ｂ ａｔ the ｓａｍｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ｔｉｍｅ ｉｎ ｖｉｖｏ ｈａｄ ｎｏ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ（Ｐ＞０．０５）， ｂｕｔ ｂｏｔｈ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｅ ｌｅｖｅｌ Ｃ（Ｐ?０．０５）． Ｉｔ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ＣＯＣｓ ｏｆ ｌｅｖｅｌ Ａ ａｎｄ Ｂ ｍｉｇｈｔ ｏｂｔａｉｎ ｈｉｇｈｅｓｔ ｐｏｌａｒ ｂｏｄｙ ｒａｔｅ ａｔ ４８ ｈ ｏｆ ｃｕｌｔｕｒｅｄ． Ｔｈｅ ｅｘｔｒｕｄｉｎｇ ｏｆ ｐｏｌａｒ ｂｏｄｙ ｓｈｏｗｅｄ ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ ｑｕｉｃｋｌｙ ｉｎ ｆｏｒｅｐａｒｔ ａｎｄ ｄｅｃｒｅａｓｉｎｇ ｓｌｏｗｌｙ ｉｎ ａｆｔｅｒｐａｒｔ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｐｉｇ； ｃｕｍｕｌｕｓ－ｏｏｃｙｔｅ ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ； ＩＶＭ； ｐｏｌａｒ ｂｏｄｙ 猪的体细胞克隆技术研究远远落后于其他动物，其主要原因是猪卵母细胞的体外成熟质量比较差、显微操作难度大，加上妊娠维持困难等问题还没有得到解决，所以直到２０００年才有所突破，获得了体细胞克隆后代［１－３］。但猪体细胞核移植重构胚的体外发育率仍然相当低，只有大约１％的克隆胚移植后能完成妊娠；其中去核是体细胞克隆的一个重要环节，去核能否成功直接影响到核移植的效率［４］。目前，盲吸法在猪卵母细胞去核中的应用比较多；尽管盲吸辅助荧光染料Ｈｏｅｃｈｅｓｔ ３３３４２的染色法能提高去核的效率，但有些学者并不支持这种做法。然而盲吸去核的质量好坏和效率高低与卵母细胞的成熟时期密切相关，成熟时间延长，卵龄增加，会使第一极体与中期染色体的位置发生偏转；若去核不完全则会导致克隆胚染色体出现不完整性，造成卵裂异常，影响克隆胚的发育。因此，确定猪卵母细胞体外成熟的最佳时期，是体细胞核移植中盲吸去核成