右环十四酮酚检测方法1．.PDF

右环十四酮酚检测方法 1．分析目标化合物 右环十四酮酚 2．仪器设备 带紫外分光检测器的高效液相色谱仪（HPLC-UV）。 3、试剂 除下列试剂外，使用附录2所列试剂。 弱碱性阴离子交换树酯小柱（500mg）：在内径8～9mm的聚乙烯管中填充500mg 弱碱性阴离子交换树酯或具有同等分离特性的物质。 柱色谱用羟基丙基化葡聚糖：与羟基丙基化学结合的葡聚糖，粒径25～100μm。 4、标准品 右环十四酮酚：含右环十四酮酚99％以上，熔点为178℃～180℃。 ５．试验溶液的制备 1）提取方法 称取5.00ｇ样品，加入20 mL乙腈：甲醇（4：1）混合溶液，均质后，以毎 分钟2,600转，离心分离5 分钟，收集有机层。残留物中加入20 mL乙腈：甲醇混 合溶液，按上述同样的条件进行离心分离，合并有机层。加入20 mL水饱和正己 烷，激烈振荡、混合5分钟后、静置，收集有机层。加入40 mL 5％硫酸钠溶液和 40 mL 二氯甲烷（特级），激烈振荡、混合5分钟后、静置，收集二氯甲烷层。 水层中加入15 mL 二氯甲烷（特级），按上述同样操作，合并二氯甲烷层，40 ℃以下除去二氯甲烷。将残留物溶解在1mL正己烷：苯（3：1）混合溶液中。 2）净化方法 ①弱碱性阴离子交换树脂柱色谱法 在弱碱性阴离子交换树脂小柱（500mg）中，注入6mL 正己烷：苯（3：1） 混合溶液，舍弃流出液。柱中注入1）所得的溶液后，注入2mL正己烷：苯（3：1） 混合溶液，舍弃流出液。柱中注入3mL 二氯甲烷（特级）：甲醇（9：1）混合溶 液，流出液在40℃以下浓缩，除去溶剂。残留物中加入0.5 mL 苯：甲醇（17： ３）混合溶液溶解。 ②羟基丙基化葡聚糖柱色谱法 在内径6mm 玻璃管中，填充高120 mm、悬浮在苯：甲醇（17：3）混合溶液 中、放置12小时的柱色谱用羟基丙基化葡聚糖，放出苯：甲醇（17：3）混合溶 液至柱上端留有少量的苯：甲醇（17：3）混合溶液。柱中注入①所得的溶液后， 注入10 mL 苯：甲醇（17：3）混合溶液，舍弃最初的2.0 mL流出液，收集后面 的流出液，40℃以下浓缩，除去溶剂。残留物中加入0.5 mL 乙腈：水（1：1） 混合溶液溶解，此为试验用溶液。 6、制作标准曲线 将右环十四酮酚标准用乙腈：水（1：1）混合溶液配制成浓度为0.01～1mg/L 的数个标准溶液，分别注入20μL于HPLC中，用峰高法或峰面积法制作标准曲线。 7．定量 注入20μL 试验溶液于HPLC 中、根据6的标准曲线求得右环十四酮酚含量。 8．确证试验 用LC/MS或LC/MS/MS确证。 9．测定条件 柱：十八烷基甲硅烷基化硅胶 (粒径5μm )， 内径4.0～6.0 mm、长150 mm。 柱温：40℃ 流动相：乙腈：水（5：6）混合溶液，调整流速使右环十四酮酚在约10 分钟流 出。 检测条件：吸光波长230 nm 10．定量限 肌肉： 0.002 mg/kg 肝脏： 0.01 mg/kg 11．注意事項 1）检测方法概述 本方法用乙腈和甲醇混合溶液从样品中提取右环十四酮酚，正己烷分配后， 转溶至二氯甲烷中。用弱碱性阴离子交换树脂柱色谱法和葡聚糖柱色谱法净化 后，HPLC-UV 测定。 2）注意点 ①柱色谱用弱碱性阴离子交换树脂每批的活度有差异，用前应进行回收率检查。 ② 肝脏样品时，用乙腈：水（1：1）混合溶液将试验溶液稀释5倍后进行试验。 ③ 由于杂质峰使高效液相色谱法测定液右环十四酮酚有困难时，不妨采用“气 相色谱—质谱仪右环十四酮酚检测方法”检测。 12．参考文献 无 13．类型 A ○气相色谱—质谱仪右环十四酮酚检测方法 1．仪器设备 气相色谱—质谱仪（GC/MS） 2．试验溶液的制备 准确取100μL“右环十四酮酚检测方法”中制备的试验溶液，每个加入100 μL 0.01μg/mL内标物二乙基－1,1,1’,1’－ｄ4－己乙烯雌酚－3，3’，5,5’ －ｄ4（以下称 DES－ｄ8。）的乙酸乙酯溶液，氮气气流下，40℃至干。残留物 中加入25μL乙酸乙酯溶解，此为试验溶液。 3．制作标准曲线 准确取20、