基因工程期末复习整理.docVIP

动物基因工程 名词解释： 1、体细胞克隆：以体细胞(包括动物成体体细胞、胎儿成纤维细胞等) 为受体，将目的基因以DNA 转染的方式导入能进行传代培养的动物体细胞，再以这些体细胞为核供体，进行动物克隆。 2、显微注射：：在显微操作仪下，将DNA用微吸管注射到处于原核时期受精卵的原核中，外源基因在受精卵繁殖过程中通过DNA复制而整合到基因组，然后将转化后的胚胎移植到受体子宫中继续发育，得到转基因动物。 3、ES细胞： 4、基因打靶：是指外源DNA通过与受体细胞染色体DNA上的同源序列之间发生重组, 整合到预定位点, 从而改变细胞遗传特性的方法。 5、基因敲除：将一个结构已知但功能不祥的基因去除，从DNA水平上设计实验，彻底破坏该基因的功能或消除表达机制，从而推测该基因的生物学功能。 6、乳腺生物反应器：通过转基因技术将外源基因在动物乳腺中高效表达，在乳汁中生产目的产品。 问题： 常用动物转基因的方法有哪些？比较优缺点 显微注射法、逆转录病毒法、胚胎干细胞法、基因打靶法、精子载体法体、细胞核移植法、磷酸钙共沉淀法。其中，常用动物转基因的方法有显微注射法、逆转录病毒法、胚胎干细胞介导法。 （1）显微注射法的优点：操作技术性很强 显微注射法的缺点：设备昂贵，胚胎死亡率高 （2）逆转录病毒法的优点：操作简便，可大量感染细胞，形成单拷贝，转化率高 逆转录病毒法的缺点：没有包装蛋白，不能形成完整的病毒颗粒 2、谈谈如何获得转基因小鼠？ 显微注射法：书118页 逆转录病毒法：书123页 胚胎干细胞法：书123页 3、转基因动物有哪些重要的应用？ （书138-143页） （1）研究基因的结构与功能，了解动物生命现象的内在本质 （2）建立多种疾病的动物模型，研究发病机理及治疗方法 （3）改善动物生产性能，提高动物育种效率 （4）作为医用或食用蛋白的生物反应器，可以通过家畜乳腺分泌大量安全、高效、廉价的人体药用蛋白。 4、比较在细菌、真核细胞和动物个体中表达外源基因的优缺点？ 动物： 优点：目的基因在哺乳动物细胞中表达的蛋白与天然蛋白的结构、糖基化类型和方式几乎相同且能正确组装成多亚基蛋白，哺乳动物细胞能以悬浮培养或在无血清的培养基中达到高密度且培养体积能达到1000L 以上 缺点： A、哺乳动物细胞的表达水平低 B、高表达细胞株构建复杂 C、细胞大规模培养工艺复杂 D、哺乳动物细胞生产的蛋白质类药物的成本较高 基因工程常规技术 一、名词解释 klenow fragment：DNA聚合酶被枯草杆菌蛋白酶水解后产生的大片段，具5’ → 3’聚合酶活性和3’ → 5’外切酶活性，是分子生物学中的重要工具。 Taq酶：水生栖热菌（Taq）中分离出的具有热稳定性的DNA聚合酶。 核酸酶S：来源于米曲霉素（aspergillusoryzas），作用于ssDNA和ssRNA。 末端转移酶：terminal transferase，来源于小牛胸腺。是仅存于前淋巴细胞及淋巴样细胞内的一种不同寻常的DNApol，催化dNTP加到DNA分子3’OH末端。 碱性磷酸酶（AKP/ALP）：同源二聚体蛋白，分子量为56KDa。每个单体由449个氨基酸组成，同时每个单体均具有一个活性中心。是能够将对应底物去磷酸化的酶，并生成磷酸根离子和自由的羟基，这类底物包括核酸、蛋白、生物碱等。包括BAP（细菌碱性磷酶）和CIP（小肠碱性磷酶）Plasmid：质粒，是细菌染色体外的闭合环状的双链DNA分子，主要有F质粒（F因子或性质粒）、R质粒（抗药性因子）、Col质粒（大肠杆菌素因子）。 表达载体：具有克隆载体的基本元件，还具有转录/翻译所必需的元件的载体。为了有效的转录，必需有强大的启动子和终止子，为了实现翻译，克隆基因必需有合适的SD（RBS） 穿梭载体（shuttle vector）：能在两种宿主生物体内复制的载体，可以运载目的基因穿梭往返两种生物之间。 MCS：多克隆位点， Cosmid：黏粒， YAC：酵母人工染色体。利用酿酒酵母染色体的复制元件构建的载体，克隆能力为200-2000kb。YAC载体含有的着丝粒,端粒和复制起点三种成份可以满足YAC自主复制，染色体在子代细胞间分离及保持染色体稳定的需要。YAC以环状方式存在，具有大肠杆菌质粒的复制元件和选择标记，以便保存和增殖。 脉冲电场凝胶电泳：DNA分子在交替变换方向的电场中作出反应所需的时间取决于它的大小。该方法可分离长至5Mb的DNA分子。 RT-PCR：反转录PCR，由一条RNA单链转录为互补DNA(cDNA)称作“逆转录”，由依赖RNA的DNA聚合酶（逆转录酶）来完成。随后，DNA的另一条链通过脱氧核苷酸引物和依赖DNA的DNA聚合酶完成，随每