在5-杂氮胞苷诱导下人脐带间充质干细胞生物活性特性及向心肌样细胞的分化概要1.doc

在5-杂氮胞苷诱导下人脐带间充质干细胞生物活性特性及 向心肌样细胞的分化 李 平，皇甫春荣，汤春辉，陈一晖(云南省第一人民医院，云南省昆明市 650032) 引用本文：李平，皇甫春荣，汤春辉，陈一晖. 在5-杂氮胞苷诱导下人脐带间充质干细胞生物活性特性及向心肌样细胞的分化[J].中国组织工程研究，2016，20(14):2117-2122. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2016.14.021 ORCID: 0000-0002-0971-6000(李平) 文章快速阅读： 文题释义： 成体干细胞：成体干细胞是指存在于一种已经分化组织中的未分化细胞，这种细胞能够自我更新并且能够特化形成组成该类型组织的细胞。成体干细胞存在于机体的各种组织器官中。在特定条件下，成体干细胞或者产生新的干细胞，或者按一定的程序分化，形成新的功能多能细胞，从而使组织和器官保持生长和衰退的动态平衡。成年个体组织中的成体干细胞在正常情况下大多处于休眠状态，在病理状态或在外因诱导下可以表现出不同程度的再生和更新能力。 人脐带间充质干细胞：是一类特殊的细胞，具备自我更新和自我增殖能力，能向心肌样细胞分化潜力，从而形成肌细胞，能够作为组织工程等领域重要的种子细胞之一。人脐带间充质干细胞具备较强的增殖能力，分离的细胞具备充质干细胞的基本生物学特性，能够在5-杂氮胞苷诱导下分化为心肌样细胞，并且该细胞能够作为心肌样细胞移植的重要来源，具有较高的临床应用价值。 摘要 背景：人脐带间充质干细胞属于一类特殊的干细胞，该类细胞数量有限，且分离、纯化难度系数较大，并且临床上对于该类细胞生物学特性缺乏认识。 目的：研究人脐带间充质干细胞的生物活性特性，探讨人脐带间充质干细胞向心肌样细胞分化的作用。 方法：无菌采集剖宫产新生儿脐带，在胶原酶Ⅱ下进行消化，采用组织块培养法分离人间充质干细胞。利用免疫细胞化学染色检测细胞表面标志，观察细胞形态学特性，并采用MTT法检测细胞增殖绘制其生长曲线，将获得的人脐带间充质干细胞进行培养，待细胞生长到70%-80%融合时，采用10 μmol/L 5-杂氮胞苷进行24 h诱导。 结果与结论：①组织块贴壁法培养1周后：可见人脐带间充质干细胞，去组织块加入培养液培养后，人脐带间充质干细胞集落生长；②第3代及第10代人脐带间充质干细胞接种24 h内：细胞为潜伏期，此后呈对数生长，倍增时间为30 h；③免疫细胞化学染色结果显示：第3代细胞90%以上表达基质细胞相关表面标志物CD44、CD29等，不表达造血及内皮细胞标志物CD28、CD31；④人脐带间充质干细胞诱导3周后：细胞突起消失，出现不规则形状，诱导4周后呈现圆形，且表达心肌特异性免疫标志物。⑤结果提示人脐带间充质干细胞具备较强的增殖能力：分离的细胞具备充质干细胞的基本生物学特性，能够在5-杂氮胞苷诱导下分化为心肌样细胞。 关键词： 干细胞；分化；人脐带间充质干细胞；心肌样细胞；组织块培养法；MTT；生长曲线；心肌样细胞； 5-杂氮胞苷；云南省自然科学基金云南省自然科学基金面上项目(2009CD08) Human umbilical cord mesenchymal stem cells induced by 5-azacytidine: bioactive properties and cardiomyocyte-like differentiation Li Ping, Huangpu Chun-rong, Tang Chun-hui, Chen Yi-hui (First People’s Hospital of Yunnan Province, Kunming 650032, Yunnan Province, China) Abstract BACKGROUND: Human umbilical cord mesenchymal stem cells belong to a special class of stem cells with a limited number, which are difficult to isolate and purify. Importantly, there is a lack of clinical understanding of biological characteristics of human umbilical cord mesenchymal stem cells. OBJECTIVE: To study the bioactive properties and cardiomyocyte-like differentiation of human umbilical