外周血单核细胞诱导的CD123+髓系树突状细胞的特性研究 .docVIP

　　外周血单核细胞诱导的CD123+髓系树突状细胞的特性研究 石军, 王敏, 万云, 池田和真 【摘要】 　　目的: 探讨体外髓系培养体系中外周血单核细胞来源的CD123+髓系树突状细胞（mDC）的生物学特性。方法: 分离健康人外周血单核细胞, 用重组的粒/单核细胞集落刺激因子（GMCSF）和白细胞介素4（IL4）将其诱导为树突状细胞（DC）。用流式细胞术（FCM）检测DC表面共刺激分子、 CD304 、 CD123和CD11C的表达, 并用间接免疫磁珠法将其中CD123+DC加以分离纯化; 激光共聚焦显微镜、 扫描电镜观察CD123+DC形态; ELISA法检测CD123+DC的IL12 分泌量; 葡聚糖吞噬试验和3HTdR渗入法分别检测CD123+DC的吞噬功能和对同种异体T细胞的刺激能力。结果: 外周血单核细胞经GMCSF和IL4诱导7 d后, 细胞表面高度表达CD86和CD11C, 中等量表达CD1a和CD123, 低表达CD83, 丧失CD14的表达, 其中, CD123和CD11C均匀分布于DC表面。免疫磁珠纯化后的CD123+DC呈现典型的不成熟DC形态, 除细胞体积较小外, 其表面突起类似于CD123-DC。CD123+DC仅微量分泌IL12, 其吞噬能力强于CD123-DC（P0.05）, 但抗原刺激功能低于后者（P0.05）。结论: GMCSF和IL4培养体系中的CD123+DC可能是DC分化发育过程中更早期的未成熟mDC, 具有独特的生物学特性。 【关键词】 髓系培养体系; 髓系树突状细胞; CD123 　　〔Abstract〕AIM: To investigate the biological characteristics of CD123+DC derived from cord blood monocytes in myeloid culture system. METHODS: The monocytes isolated from peripheral blood etery. CD123+DC agic cell sorting separation technique. The morphological properties of CD123+DC icroscope and scan electron microscope. The concentration of IL12 secreted by DC ixed T lymphocyte reaction (MLR). RESULTS: FACS analysis shooderate expression of CD1a and CD123, loorphology of immature DC ilar short cytoplasmic projections as CD123-DC. CD123+DC secreted loore significant endocytosis and less antigen presentation function than that of CD123-DC（P0.05）. CONCLUSION: CD123+DC induced ight be more early phase of immature myeloid DC along yeloid cultured system; myeloid dendritic cell; CD123 　　树突状细胞（dendritic cell, DC）是功能强大的专职抗原提呈细胞, 将体外培养的DC回输到患者体内, 以激发机体产生明确的抗肿瘤免疫应答, 已成为有效的临床抗肿瘤治疗手段之一。根据其表面标记, DC分为髓系DC（myeloid DC, mDC)和浆细胞样DC（plasmacytoidDC, pDC）两个大的亚群, 前者主要用于抗肿瘤免疫治疗, 后者主要参与免疫耐受〔1〕。DC是个非均质性的群体, 最近, 在体外诱导的mDC表面发现淋巴系DC特异性标记CD123的高度表达, 但这群兼具髓系和淋巴系标记的DC是否为一个特殊的亚群尚未见报道。我们将外周血单核细胞诱导的髓系CD123+DC加以分离纯化, 结合细胞形态、 表面标记和对T细胞的刺激功能对其生物学特性进行研究。 　　1 材料和方法 　　1.1 材料 　　采集健康自愿者外周血50 mL, 肝素抗凝。白细胞介素4（rebinant human interleukin4, rhIL4）由日本盐野制药公司惠赠。重组人粒/单核细胞集落刺激因子（rebinant human Granulocyte macrophage colonystimulati