大量培养诱导乳腺癌患者自体 DC 和 CIK 细胞的研究 .docVIP

　　大量培养诱导乳腺癌患者自体 DC 和 CIK 细胞的研究 王先明 何劲松 陈伟财 王敏 闵军 邵静 【摘要】 目的 探讨获得大量乳腺癌患者自体树突状细胞（dendritic cells, DCs）和细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine-induced cells, CIK 细胞）的可行性。方法 实验组，乳腺癌患者经外周血干细胞动员，取 50 mL 外周血分外周血单个核细胞（PBMC），用 AIM-V 无血清培养基培养 DCs 和 CIK，并设健康人对照组，用 RPMI 1640 完 全营养培养基。结果 实验组 PBMC 产出 2×108 个并诱导出 1.2×107 个 DCs 和 2×109个 CIK 细胞，显著高于对 照组（P 0.01）。DCs 的 CD86、CD11c 和 HLA-DR 分子都有较高表达，CIK 细胞 CD3+、CD56+双阳性细胞达 到14.41%。细胞毒实验提示 CIK 细胞有强大的杀瘤活性。结论 乳腺癌患者经外周血干细胞动员，用 AIM-V 无 血清系统培养，少量外周血可诱导大量优质自体 DCs 和 CIK 细胞。 【关键词】 乳腺癌；干细胞动员；树突状细胞；细胞因子诱导的杀伤细胞 〔Abstract〕 Objective To investigate the possibility of the generation of large numbers of autologous Dendritic cells and Cytokine-induced killer cells from breast cancer patients by peripheral blood stem cells mobilized. Methods Peripheral blood stem cells of breastcancer patients obilized by using rh GM-CSF. Peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from 50 mL peripheral blood of breast cancer patients (experiment) and healthy donors (control) adherent PBMC edium AIM-V (experiment) or RPMI 1 640 (control). CIK cells fromnon-adherent PBMC edium AIM-V(experiment) or RPMI 1 640 (control). Results The number of PBMC, DCs and CIK cells is 2×108, 1.2×107 and 2×109 in experimental group, bers of full mature autologous Dendritic cells and Cytokine-induced killer cells can generate from breast cancer patients by peripheralblood stem cells mobilized and suit for adoptive immunotherapy of breast cancer patients. 〔Key HC 限制细胞毒性淋巴细胞，CIK 细胞的主要效应细胞是高度增生的 CD3+、CD56+双阳性表型 T 细胞，又被称为 NK 细胞样 T 淋巴细胞，兼具有 T 淋巴细胞强大的抗肿瘤活性和 NK 细胞的非限制性杀瘤优点，在体外可大量扩增[3]，DCs 和 CIK 细胞理想的过继性免疫治疗细胞。但临床应用仍受到很大限制，一是由于常规培养基含有异种血清，二是常规由患者 PBMC 诱导达到治疗量自体 DCs 和 CIK 细胞，需大量外周血。我们对乳腺癌患者进行外周血干细胞动员和用 AIM-V 无血清培养基培养，探讨获得大量自体 CDs、CIK 细胞和建立符合临床治疗标准的培养诱导系统的方法。 1 材料和方法 1.1 材料 RPMI 1640 干粉、胎牛血清、L-谷氨酰胺（L-glutamine）和青霉素-链霉素双抗（Gibco 公司）；2-巯基乙醇（2-mercaptoethanol）均购自 Sigma 公司； Ficoll 淋巴细胞分离液（相对密度 1.077±0.001 g/mL）购自 LymphoprepTM 公司；重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、白细胞介素 4（IL-4）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）均购自PEPRO TECH 公司；藻红蛋白（PE）标记小鼠抗人C