糖尿病创面与正常皮肤创面差异表达基因的筛选研究.pdfVIP

摘要 摘 要 目的：应用基因表达谱芯片对糖尿病大鼠创面与正常大鼠创面基因表达谱 进行对比分析并筛选差异基因，初步探讨糖尿病大鼠创面与正常大鼠创面基因 表达的特征及其可能的生物学意义，为治疗糖尿病创面提供新的思路和线索。 方法：将 SD 雄性大鼠随机分为糖尿病组和正常对照组。一次性腹腔注射 链脲佐菌素(Streptozocin ，STZ，) ，剂量为 65 mg ／kg ，制备成糖尿病大鼠模 型。给药 3 周后抽取正常大鼠和稳定成模的糖尿病大鼠，在背部制成直径 2.0 cm 的圆形全层皮肤缺损创面。72 小时后取创面组织，TrizoI 一步法提取组织总 RNA ，琼脂糖甲醛变性凝胶电泳进行质检。逆转录法将 cy3 荧光标记到组织的 cDNA 上，制成探针后与表达谱芯片杂交，用 Agilent G2565CA Microarray Scanner 扫描，即得杂交图片。随后用Feature Extraction （v10.7 ）软件分析杂交 图片并提取数据、博奥表达谱芯片Analyzer 软件进行分析，把图像信号转化为 数字信号，以 2 倍差异表达值筛选出差异表达基因。选择其中上调或下调明显 的基因，用实时 RT—PCR 技术进一步验证相关基因的可靠性。同时，对筛选 出的差异表达基因进行基因功能分类。 结果：与正常大鼠创面组比较，糖尿病大鼠组创面差异表达基因2206 个， 其中上调基因785 个、下调基因 1421 个，明显上调基因231 个，明显下调基因 463 个，实时 RT—PCR 验证结果与芯片筛选结果一致。根据基因功能分类发现 差异基因涉及糖代谢、蛋白质合成、离子通道、神经传导等多个生物学过程。 结论：糖尿病大鼠创面与正常大鼠创面基因表达谱有明显不同，其差异可 能与其创面修复能力不同密切相关。 关键词：糖尿病；创面；表达谱；基因芯片 II 万方数据 Abstract ABSTRACT Objective: Analyzing and screening of differential expression genes of Diabetic rats and normal rats wounds by cDNA microarray technique, Preliminary research on characteristics of expression genes and their possible biological significance in diabetic rats and normal rats wound, To provide a new way and some new clues for the treatment of diabetic wounds. Methods: Male SD rats were randomly divided into DM group and normal control group. DM modeled was prepared with a single intraperitoneal injection of streptozoocin (STZ). at the dose of 65 mg / kg. Diameters of 2.0