[食品地方标准]DB21∕T 1886-2011 鸡传染性法氏囊病技术规程.docVIP

ICS65.020.30 B 41 备案号： DB21 辽宁省地方标准 DB 21/ T1886—2011 鸡传染性法氏囊病诊断技术规程 Diagnostic Techniques procedures for Avain Infectious Bursal Disease 点击此处添加与国际标准一致性程度的标识 2011 - 01 - 17发布 2011 - 02 - 01实施 辽宁省质量技术监督局发布 前言 本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。 本标准的附录A为资料性附录。 本标准由辽宁省动物疫病预防控制中心提出。 本标准由辽宁省畜牧兽医局归口。 本标准负责起草单位：辽宁省动物疫病预防控制中心、辽宁省动物医学研究院。 本标准主要起草人： 李井春鸡传染性法氏囊病诊断技术规程 范围 本标准规定了 本标准适用于辽宁省境内的GB/T 19167—2003 传染性囊病诊断技术。 GB/T 19438.1—2004 禽流感病毒通用荧光RT—PCR 检测方法。 流行特点 4—6周龄鸡最易感，10日龄至开产前也可感染，火鸡感染后不发病。流行特点是传染性强，传播快，感染率和发病率高。可对雏鸡造成免疫抑制，从而导致鸡对法氏囊病的免疫失败。 临床症状 潜伏期为1—2天，根据临床症状可分为典型感染和非典型感染。典型感染多见于新疫区或高度感染鸡群，呈急性爆发。个别鸡突然发病，1天左右波及全群。病鸡表现精神沉郁，不食或少食，羽毛蓬松，翅下垂，有些鸡自啄泄殖腔。很快出现腹泻，排白色稀粪或蛋清样稀粪，内含细石灰渣样物。肛门周围羽毛污染严重。病鸡畏寒严重者伏地、严重脱水，虚弱。反应迟钝，发病后1—2天死亡。整个鸡群死亡高峰在发病后3—5天，以后2—3天逐渐平息。死亡率在30%左右，严重的达60%。非典型性感染主要见于老疫区或具有一定免疫力的鸡群，以及感染低毒力毒株的鸡群。感染率高，发病率低，症状不典型，鸡主要表现为精神不振，食欲减退，轻度腹泻，死亡率在3%左右。病程较长，且反复发生，该病型主要造成免疫抑制。 病理变化 典型病例表现尸体脱水，胸肌、腿肌有不同程度的条状或斑点状出血。特征性病变为法氏囊肿大、水肿出血。输尿管变粗，管腔内充满石灰乳样物质。泄殖腔积有多量灰白色稀粪。腺胃和肌胃交界处常有横向出血斑点或溃疡。盲肠扁桃体出血、肿胀。有时可见肝、脾、肺等器官出血、坏死。亚临床感染或变异株感染的病例常见法氏囊的萎缩，皱壁扁平，囊腔内有干酪样物质。有时胸肌、腿肌轻度出血，肾脏肿胀，有尿酸盐沉积。本病的特征性组织学病变时法氏囊充血、出血，髓质大量淋巴细胞变性、坏死，有多量细胞碎片、异染颗粒。随后因网状内皮细胞及法氏囊上皮细胞增生而形成腺体状结构。 实验室检测 依据本病流行病学特点、临床症状、病理变化等可做出初步诊断，确诊需进行实验室诊断。 病原分离及鉴定 按照GB/T 19167—2003的方法进行。 血清学检测 按照GB/T 19167—2003的方法进行。 聚合酶链式反应试验 材料 样品的采集与处理 无菌采集病鸡的法氏囊、肾、脾等内脏器官至少500mg，保持4℃—8℃快速送往检测单位。在无菌室内将样品充分研磨，并加入0.04mol/L PBS(pH7.4)制成1：5悬液，3 000rpm/min离心10min，取上清液备用。阳性对照可选用IBDV中等毒力活疫苗。 试剂及引物 Taq DNA聚合酶、AMV反转录酶、dNTP、DL2000 DNA Marker、琼脂糖、核酸提取试剂Trizol、氯仿、异丙醇、DEPC水、ddH2O、75%乙醇（DEPC水配制）。特异性引物序列为上游5′GCTGTCATTGAAGGCGTGCGAGAA3′；下游5′TGGGACAACGGTGTAGTCTCTCCC3′。目的片段大小为147bp。 方法 样品中RNA的提取 阳性对照与样品同时提取RNA，实验应使用DEPC水作为阴性对照。取病毒上清液250μL加入用DEPC水处理过的1.5mL离心管中，加入750μL Trizol病毒裂解液，颠倒混匀。 室温静置5min，加入200μL氯仿，混匀。 静置2min，4℃12 000g离心10min。DEPC水处理过的1.5mL离心管中，再加入等体积的异丙醇，混匀。 静置5min，4℃12 000g离心10min。μL 75%的乙醇（用DEPC水配制）；4℃13 000g离心2min。5min。 加40μL DEPC水溶解-70℃保存。 RT反应 在0.2mL PCR管中配制如下体系： 上游引物 1μL 下游引物 1μL RNA模板 1μL 5×Buffer（反转录酶） 2μL dNTP（10mM） 1μL RNA酶抑制剂 0.5μL AMV反转录酶 0.5μL DEPC水 3μ