[食品地方标准]DB21∕T 1928-2011 西伯利亚花楸组培快繁技术规程.docVIP

DB21 辽宁省地方标准 DB21/T 1928—2011 西伯利亚花楸组培快繁技术规程 2011-12-28 发布 2012-01-28 实施 辽宁省质量技术监督局 发 布目 次 前言 III 1 范围 1 2 规范性引用文件 1 3 术语和定义 1 4 培养基制作 3 5 外植体处理 4 6 接种 5 7 初代培养 5 8 增殖培养 6 9 生根培养 7 10炼苗 7 11驯化 8 12 移栽 9 13 定植 9 附录A （资料性附录） MS培养基母液配制表 10 附录B （资料性附录） 常用植物生长调节剂的配制 11 参考文献 12 前言 本标准依据GB/T 1.1规则起草。 本标准的附录A和附录B为资料性附录。 本标准由辽宁省林业厅提出并归口。 本标准起草单位：辽宁省林业科学研究院。 本标准主要起草人：叶景丰、马冬菁、陈罡、潘文利、范俊岗、周志权、高宇、黄国学、高军、魏忠平、祁爽。西伯利亚（Sorbus sibirica Hedl）在无菌条件下，用接种工具，2次增殖培养的时间间隔，即增殖周期。 初次使用的容器，清洗干净后，用高压灭菌锅0.1MPa～0.11MPa（120℃～122℃）灭菌20min～25min，干后备用。 名称，配制时间，配制1 L培养基需要的吸取量，放入冰箱冷藏室中储存。 1L 1mol·L-1氢氧化钠（NaOH）和盐酸（HCL）的配制 称取NaOH40g，用少量溶解，定容至1L。 量取38%（m/m），密度为1.19的HCl 80.7ml加蒸馏水，定容至1L。 100ml 500mg·L-16-苄氨基嘌呤（6-BA）的配制 用万分之一电子天平称取50mg细胞分裂素6-苄氨基嘌呤（6-BA），用3~5滴1mol·L-1盐酸溶解，加蒸馏水定溶至100ml，放入冰箱冷藏室储存。 生长素萘乙酸（NAA）和吲哚丁酸（IBA）的配制 用万分之一电子天平称取生长素萘乙酸（NAA）和吲哚丁酸（IBA）各50mg，分别用3~5滴1mol·L-1氢氧化钠溶解，加蒸馏水定溶至100ml，放入冰箱冷藏室储存。 1L按附录A表A.1中培养基MS配方和称取量，依次加入各母液混合。 量取琼脂粉5g加热至完全溶解后，加入母液中。 量取蔗糖30g，加热溶解后，加入母液中。 加蒸馏水定溶至1L。应采用加热后的蒸馏水，防止琼脂凝固。 1mol·L-1氢氧化钠或盐酸充分搅拌后，调节PH值至5.8～5.9。 分装 在10min之内将培养基分装到培养器皿中。 50ml三角瓶，分装培养基20ml/瓶；规格为5.3cm×6.0 cm×9.2 cm(口径×胸径×高) 250ml的组织培养瓶，分装培养基40ml/瓶。 封口膜采用聚丙烯塑料膜，厚度0.06mm(6丝)，用线绳扎紧。 ℃~122℃），20min~25min 保存 灭过菌的培养基放在接种室保存，灭菌后凝固的培养基应在2周内用完。 外植体处理 选树 选择生长健壮，无病虫害的西伯利亚花楸在春季生长旺盛的季节（5月～6月），选择连续3天以上的晴天，剪取带有顶芽或幼嫩茎段的枝条，标明采集时间、采集地点。 贮存于车载冰箱（0℃～4℃），长途运输，应采取空运的办法。 70%酒精的配制 量取70ml的无水乙醇加30ml的蒸馏水混合。 接种器械和器皿用报纸包扎好，高压灭菌锅灭菌后备用，灭菌方法同培养基灭菌。 器皿采用装有定性滤纸的培养皿，每接一批苗后，换一张定性滤纸。 开启超净工作台、接种室、缓冲间紫外灯20min～30min。 关闭紫外灯，开启超净工作台风机通风20min以上。 接种人员在更衣室更换拖鞋，穿接种服，戴上口罩后进入接种室。洗干净手后，用70%酒精喷手消毒。 每批转接切取的芽数应不多于15个，每转接完一批苗，器械在酒精灯外焰上灼烧10s以上， 接种时应准备两套器械，交换使用。外植体或试管芽均匀接种于培养容器中，接种深度以搬运过程中不倒且切口不接触培养容器底部为准。 接种完成后在培养容器上标明接种日期。 每次接种完毕后，用70%酒精擦拭超净工作台台面。 1L 0.1%升汞配制与保存 称取1g HgCl2，加少量温蒸馏水溶解，用蒸馏水定溶至1L，分别装入2个棕色酒精瓶中，盖好盖，同时盖外用封口膜扎紧，贴上配制浓度、日期和有毒标签，保存于接种间。 无菌水的准备 量取500ml蒸馏水，装入1L三角瓶，封口膜扎紧后，放入高压锅内灭菌，灭菌方法同培养基灭菌。 MS+6-BA0.2 mg·L-1～0.5mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1～0.3mg·L-1+琼脂粉5g·