利心丸中防己诺林碱HPLC检测方法建立及其评价.doc

利心丸中防己诺林碱HPLC检测方法建立及其评价 　　[摘要]目的建立利心丸中的防己诺林碱含量测定方法。方法采用高效液相色谱法，以Inertsil ODS-3（5um，4.6mm×250mm）色谱柱，甲醇一乙腈一水一二乙胺（52：20：28：0.08）为流动相，检测波长：282nm，流速：1.0mL/min。结果己诺林碱在0.1617～0.9702ug的范围内线性关系良好，r=0.9996；平均加样回收率是98.50%，RSD=1.26%。结论方法操作简便，专属性强，准确度高，可用于利心丸的质量控制 [关键词]利心丸；防己诺林碱；HPLC [中图分类号]R284.1 [文献标识码]A [文章编号]2095-0616（2017）03-57-04 利心丸（浓缩水丸）收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》第八册，（标准编号为WS3-B-32）。由貂心、地黄、防己、茯苓、牡丹皮等八味中药材制成的中药复方制剂。具有养心安神的功效，临床主要用于风湿性心脏病，心动过速，心律不齐，心力衰竭等而见心血不足等症者。关于利心丸的质量控制，原标准主要采用显微和紫外分光光度法进行鉴别，方法过于简单，无含量测定。相关文献报道主要集中在牡丹皮中丹皮酚的含量测定及对地黄、防己和牡丹皮的TLC定性鉴别。本文在相关文献的研究基础上，参照《中国药典》（2015版，一部）防己药材含量测定方法，首次对利心丸（浓缩水丸）中防己诺林碱的含量采用高效液相色谱法进行分析，并建立了完整的质量检测方法。结果表明，本方法稳定可靠、准确度高、重现性好。可通过定量检测利心丸（浓缩水丸）中防己诺林碱的含量，有效控制其产品质量 1.仪器与试药 安捷伦1 100型高效液相色谱仪；KQ-250型台式超声波处理器（上海右一仪器有限公司）；HWS-26电热恒温水浴锅（广州沪瑞明仪器有限公司）；101A系列电热恒温鼓风干燥箱（常州华冠仪器制造有限公司）；P225D型天平（北京赛多利斯） 防己诺林碱对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110793-200605），利心丸（浓缩水丸）样品，吉林特研药业有限公司生产（批号20141205）；利心丸阴性样品（自制）。甲醇、乙腈均为色谱纯，水为纯化水，其他试剂为分析纯 2.方法与结果 2.1色谱条件 色谱柱：Inertsil ODS-3（5um，4.6mm×250mm）；流动相：甲醇一乙腈一水一二乙胺（52：20：28：0.08）；检测波长：282nm；流速：1mL/min；柱温：25℃；进样量：10uL 2.2溶液的制备 2.2.1对照品溶液的制备精密称取防己诺林碱对照品5.39mg，置100mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，制成53.9ug/mL的对照品溶液，备用 2.2.2供试品溶液的制备取利心丸（浓缩水丸），研细，取约0.5g，精密称定，置圆底烧瓶中，加入2%盐酸甲醇溶液50mL，称定重量，回流提取30rain，放冷，再称定重量，用2%盐酸甲醇溶液补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得 2.2.3阴性对照溶液的制备取不含防己利心丸阴性样品，按照利心丸（浓缩水丸）制备工艺制成缺防己的阴性样品，再按“2.2.2”项下供试品溶液制备方法，制成阴性对照溶液 2.2.4专属性考察分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液阴性对照溶液（20、10、20uL）注入液相色谱仪中，按照“2.1”项下色谱条件进样测定。结果表明，本方法具有良好的专属性。色谱图见图1 2.3线性关系考察 精密吸取2.2.1项下的防己诺林碱对照品3、6、9、12、15、18uL注入液相色谱仪进行测定。以防己诺林碱进样量（ug）为横坐标，峰面积为纵坐标作图，计算回归方程为：Y=824.64X-1.463，r=0.9996。结果表明：防己诺林碱进样量在0.1617～0.9702ug范围内，进样量与峰面积呈良好的线性关系 2.4中间精密度试验 取同一批利心丸样品（批号适量，共6份，精密称定，分别按照“2.2.2”项下方法制备成供试品溶液，在同一实验室内，不同时间，由不同分析人员在不同的设备上进行6次独立测定，以测定结果的相对标准偏差反映实验方法的精密度。测定结果表明，防己诺林碱的平均含量是55.58ug，g，RSD是1.94%（n=6），该方法中间精密度良好 2.5重复性试验 取同一批利心丸样品（批号6份，精密称定，分别按照“2.2.2”项下方法制备成供试品溶液，在相同条件下，由同一分析人员在较短的间隔时间内按照“2.1”项下色谱条件进行6次独立测定，计算防己诺林碱的含量，以测定结果的相对标准偏差反映该测定方法的重复性。结果表明，样品