一次性混合技术优异性能的完美诠释—低pH孵放病毒灭活工艺中的应用.pdfVIP

一次性混合技术优异性能的完美诠释 —低pH 孵放病毒灭活工艺中的应用 “混合”这个普通的不能再普通的名词想必大家在生活中也随处可以听到，浓香扑鼻的咖啡，清凉爽口的饮料， 这些生活中耳熟能详的饮品都是通过不同成分的混合制成，整个混合过程由一根搅拌棒完成。然而，在专业的大规 模生物制药工业生产领域，特别在高风险高技术操作难度的低 pH 孵放病毒灭活工艺中，我们是怎么进行有效的混 合同时又能确保工艺的安全呢，赛多利斯的一次性混合技术将给您完美的解答。 目前，在生物制品生产工艺中，病毒去除和灭活已经成了必不可少的一个工艺步骤，SFDA 公布的《人用单克 隆抗体质量控制技术指导原则》也建议加入病毒去除/灭活方法。以抗体生产工艺为例，通常在抗体纯化过程中除 了要考虑回收率和纯度外，还须有效地灭活和清除病毒，一般最有效的病毒去除/灭活方法包括：低pH、加热、S/D （溶剂/去污剂）、膜过滤等。在抗体工艺流程设计中，典型的设计是在Protein A 亲和层析后加上病毒灭活的工艺， 而这一步层析又是在低pH 下洗脱样品的，因此采用低pH 孵育来灭活病毒是最简单快捷的方法。 鉴于目前国内单克隆抗体的阶段与规模，使用传统系统来完成低 pH 灭活步骤相对较为普遍，如玻璃瓶配合磁 力搅拌转子或简单的不锈钢罐。传统的方法虽然比较简单，但不可避免的产生如下问题： 1．混合效果不佳或剪切力过大，导致调节过程长或抗体损失大； 2 ．离线检测pH，速度慢且不能及时反馈数据；容易调过使抗体长时间暴露于较差的环境中，造成聚体或电荷 异构体的增加甚至沉淀； 3 ．多次取样或开放的系统引入生物负载的风险； 4 ．罐体清洗/清洁验证及交叉污染的风险。 面对传统方法所带来的种种问题，新型的一次性混合系统的上市恰恰避免了上述风险，不仅如此，其在线 检测pH 及超洁净、低剪切混合的特性，使整个低pH 孵放病毒灭活的速度及收率得到大大的提高，是一种既安 全又高效的混合方法。下面将以一系列实验对比来阐述新型的一次性混合技术在低pH 病毒灭活中的应用优势。 一般低pH 病毒灭活的工艺为：在Protein A 亲和层析后，合并洗脱液，将该溶液的pH 值调节到较低值（通常 为3.2 ），并在此pH 值保持30 至60min。然后迅速将pH 值再次调节至下一步精纯所需 （如5.5 ），以最大限度地缩 短蛋白质暴露于低 pH 环境中的时间。然后对产物进行过滤，并转运至合适的位置，用于进一步的精制步骤，如阳 离子交换层析等。使用一次性混合系统（50L ）模拟整个工艺，通过用于LevMixer®的Flexel®储液袋的接头从顶端手 动添加1M HCl|NaOH，转速70rpm 不会产生涡旋，最大限度地减小了剪切力，通过一次性pH 电极即时读取pH 值。 如图1： 图1：在50L Flexel®LevMixer® 中进行低pH 病毒灭活 （Protein A 洗脱缓冲液0.1M 甘氨酸-35mM NaCl ），体积分别为12L （浸没一次性使 用pH 电极的最小体积*）、30L （中间体积）、65L （50L Flexel® LevMixer®的最大容量）。 如图所示，混合时间测试结果如下： pH set point Time(min) 装有溶液的储液袋: 装有溶液的储液袋: 装有溶液的储液袋: 12L* pH 3.8 30L* pH 3.8 65L* pH 3.8 3.21 2.0 4.8 11.7 5.53 3.8 10 17.5 从上述实验结果可以看到，在使用1M HCl|NaOH 这样的强酸强碱来进行pH 混合调节过程中，新型的一次性混合型 在处理十几升、数十升甚至更大提及都有非常好的混合性能，又表现出极高的混合效率，不仅操作简便，还可以实 时监测pH，确保低pH 病毒灭活工艺的稳定性。 尽管大部分用户在该工艺中采用强酸强碱来调节并维持 pH，但是也有少部分用户在实际应用工艺中使用磷酸 盐缓冲液代替强酸强碱，以期降低过程中蛋白沉淀的风险（该方法缺点是会导致下一步