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北京信息技术服务有限公司 北京信科奥达科技有限公司 简称“信科奥达”，主营生物技术服务及其配套试剂、耗材、仪器的研发、生产和销售，秉承“专业、求实、开拓、创优”的服务理念，为客户提供专业化的技术服务及解决方案。 信科奥达的产品及服务有： 耗材:Fisher耗材、美国Crystalgen产品、SinoAmerican Proteomics毛细管色谱柱、corning产品 仪器：北京四环仪器厂的冷冻干燥机、美国BIORAD公司电泳槽、Fisher仪器 抗体：abcam、Abnova、RD、santa cruz、genetax、cell signaling 试剂 ：自产试剂、荧光定量PCR试剂盒、常规生化试剂 技术服务包括： 荧光定量技术服务 双荧光素酶报告基因检测服务 质谱鉴定技术服务 一、 荧光定量技术服务 （一） 项目简介 Real Time PCR法是实时监测解析PCR扩增量的方法。因其无需电泳，大大减低了实验污染的机率，且具有快速、可对检测靶基因定量而倍受青睐。实时荧光定量PCR避免了传统PCR以终产物检测定量产生的偏差，提高实验的重复性。该技术已被广泛用于检测细胞、细菌等mRNA表达量的变化；比较不同组织的mRNA表达差异；验证基因芯片，siRNA干扰的实验结果。我们为您提供全套实时荧光定量PCR技术及解析服务：您只需提供组织或细胞标本，我们为您完成RNA抽提，cDNA制备，实时定量PCR，标准曲线制备及数据分析的所有步骤。 1、TaqMan探针方法 该技术以美国 ABI 公司为代表。 PCR 扩增时，在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针。该探针为一直线型的寡核苷酸片断，两端分别标记一个荧光报告基团和一个荧光淬灭基团，在TaqMan探针法的定量PCR反应体系中，包括一对PCR引物和一条探针。探针只与模板特异性地结合，其结合位点在两条引物之间。探针的5′端标记有报告基团(Reporter, R)，如FAM、VIC等，3′端标记有荧光淬灭基团(Quencher, Q)，如TAMRA等。当探针完整的时候，报告基团所发射的荧光能量被淬灭基团吸收，仪器检测不到信号。随着PCR的进行，Taq酶在链延伸过程中遇到与模板结合的探针，其3′→5′外切核酸酶活性就会将探针切断，报告基团远离淬灭基团，其能量不能被吸收，即产生荧光信号（图4）。所以，每经过一个PCR循环，荧光信号也和目的片段一样，有一个同步指数增长的过程。信号的强度就代表了模板DNA的拷贝数。 2、SYBR Green I嵌合荧光法 SYBR Green I荧光染料技术原理：SYBR Green I是一种只与DNA双链结合的荧光染料（图2）。当它与DNA双链结合时，发出荧光；从DNA双链上释放出来时，荧光信号急剧减弱。因此，在一个体系内，其信号强度代表了双链DNA分子的数量。SYBR Green荧光染料法定量PCR的基本过程是：1、开始反应，当SYBR Green染料与DNA双链结合时发出荧光。2、DNA变性时，SYBR Green染料释放出来，荧光急剧减少。 3、在聚合延伸过程中，引物退火并形成PCR产物。 4、聚合完成后，SYBR Green染料与双链产物结合，定量PCR系统检测到荧光的净增量加大。 SYBR Green I荧光染料能与所有的DNA双链相结合，对DNA模板没有选择性，所以特异性不如TaqMan探针。要想用荧光染料法得到比较好的定量结果，对PCR引物设计的特异性和PCR反应的质量要求就比较高。在此前提下，本法是一种成本低廉的选择。 （二） 服务项目 1、定性分析 PCR反应结束后的PCR产物无需电泳检测，可以通过Real Time PCR方法，简单快速地对目的基因进行高特异性、高灵敏度的检测，同时闭管操作的实时检测可以有效防止反应产物的污染。本技术可以广泛应用于病毒、病原菌等致病微生物的检测以及各种生物品种的鉴定等。 2、绝对定量 绝对定量首先必须构建与检测样品目的基因具有相同序列的标准品。使用已知浓度的标准品制作5 个点以上的标准曲线后，可以使用标准曲线对未知浓度的检测样品进行绝对量（起始拷贝数）分析。 3、相对定量（mRNA表达量分析） 基因表达的研究一般采用相对定量的方法。相对定量法必须对样品的目的基因和参比基因内标同时分别进行定量，然后求出对于参比基因的目的基因的相对量。通过对样品间的目的基因的相对量进行比较，可以对不同样品间的mRNA进行表达量分析。参比基因通常选用β-actin。通过同时对参比基因的实时检测，可以对样品之间由于起始细胞数不同、或RNA提取效率的不同等造成的RNA量误差进行校正，达到在严格意义上对样品之间的mRNA表达量进行分析之目