应用HPLC测定双黄连口服液中主要成分含量.doc

应用HPLC测定双黄连口服液中主要成分含量 　　摘要：目的：建立双波长高效液相色谱法梯度洗脱方法测定双黄连口服液中主要成分含量。方法：采用HederaODS-2色谱柱，以0.2%磷酸水溶液-甲醇流动相进行梯度洗脱，流速1.0ml/min，检测波长324nm、280nm，柱温为30℃。结果：该方法在试验浓度范围内线性关系良好、溶液稳定性、专属性良好，且与《中国药典》方法检验结果一致。结论：本方法用于双黄连口服液主要成分含量测定，操作简便、准确 关键词：高效液相色谱；黄芩苷；绿原酸；连翘苷；含量 双黄连口服液组方金银花、黄芩和连翘。具有疏风解表、清热解毒之功效，临床上常用于治疗细菌和病毒引起的感冒、流行性感冒以及气管炎、扁桃体炎、肺炎等症。《中国药典》2010年版一部采用高效液相色谱法对双黄连口服液中主要成分黄芩苷、绿原酸、连翘苷含量分别进行测定。供试品溶液需分别制备，检验时限较长，检验方法较为繁琐。本研究通过建立双波长高效液相色谱法梯度洗脱方法用于双黄连口服液中黄芩苷、绿原酸、连翘苷含量的同时测定，操作更加简便快速，具体方法学考察如下： 1.仪器与试药 1.1仪器 CPA225D电子天平（赛多利斯公司） Agilent1260高效液相色谱仪，HP1100型二极管阵列检测器（安捷伦科技有限公司） 1.2试药 黄芩苷、绿原酸、连翘苷对照品（中国食品药品检定研究院） 甲醇为色谱纯试剂（迪马科技公司） 磷酸为色谱纯（天津市科密欧化学试剂有限公司） 试验用水为二次蒸馏的纯化水 2.方法 2.1色谱条件与系统?m用性试验 采用Hedera ODS-2色谱柱（4.6mmx250mm，5μm）。0.2%磷酸水溶液为流动相A，甲醇为流动相B，梯度洗脱程序：0-5min，20%→30%B；5-35min，30%→45%B；35-50min，45%→70%B；50-55min，70%→20%B；55-60min，20%B。流速1.0ml/min，检测波长324nm、280nm，柱温为30℃，进样量为10μl。各组分分离度、拖尾因子在0.95至1.05之间 2.2混合对照品贮备液的制备 分别精密称取绿原酸对照品25.12mg置25ml容量瓶内、连翘苷对照品20.22mg置25ml容量瓶内，用50%甲醇溶解并稀释至刻度；再精密称取黄芩苷对照品29.95mg，精密量取上述两种溶液各5ml置同一100ml量瓶内，用50%甲醇制成每毫升含黄芩苷299.5μg，绿原酸50.24μg，连翘苷20.22μg的混合溶液作为混合对照品贮备液 2.3供试品溶液的制备 精密量取双黄连口服液1ml置50ml量瓶中，加50%甲醇适量超声处理15min，加50%甲醇定容至刻度，摇匀后经0.45μm的微孔滤膜滤过即得 3.方法学考察 3.1线性关系考察 分别精密量取混合对照品贮备溶液0.5ml、1.0ml、2.0ml、5.0ml、10.0ml，分别置于10ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取上述溶液10μl注入高效液相色谱仪，每个浓度进一针，记录峰面积。以各对照品浓度为横坐标，对应的峰面积为纵坐标，进行线性回归，见表1。结果表明：黄芩苷、绿原酸、连翘苷试验浓度范围内线性关系良好 3.2溶液稳定性试验 精密量取混合对照品贮备溶液5.0ml，置25ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀。分别于溶液配制完成后0小时、1小时、2小时、4小时、6小时、8小时精密量取10μl注入高效液相色谱仪，每个时间点进样一针，记录峰面积。计算6针峰面积之间的相对标准偏差（RSD%），黄芩苷、绿原酸、连翘苷6次测定峰面积的RSD分别为0.56%、0.22%、0.64%。结果表明：黄芩苷、绿原酸、连翘苷混合溶液在8小时内基本稳定 3.3专属性试验 按照产品处方，分别取黄芩提取物、金银花提取物、连翘提取物及适量蔗糖分别制成缺一味制剂，按供试品溶液制备方法制成缺一味空白溶液，精密量取10μl注入高效液相色谱仪。相应缺一味空白溶液色谱在黄芩苷、绿原酸、连翘苷处无吸收峰。结果表明在试验专属性较好 3.4两种含量测定方法结果比较 取市售双黄连口服液三批，分别采用《中国药典》双黄连口服液项下含量测定方法和本次研究方法对黄芩苷、绿原酸、连翘苷含量进行测定，结果见表2。结果表明试验方法用于双黄连口服液中黄芩苷、绿原酸、连翘苷含量测定与《中国药典》方法检验结果一致 3.讨论 双黄连口服液为黄芩、金银花、连翘经过提取制成的纯中药制剂口服液，具有辛凉解表，清热解毒的功效。《中国药典》中分别对黄芩、金银花、连翘含量进行了具体的规定，其中黄芩含量以黄芩苷计每1