使用acquity qda质谱检测器对单克隆抗体亚基进行工艺 - waters.pdfVIP

[ 应用纪要 ] 使用ACQUITY QDa质谱检测器对单克隆抗体亚基进行工艺监测以快速 监测关键品质属性 Brooke M. Koshel、Robert E. Birdsall和Ying Qing Yu 沃特世公司 美国马萨诸塞州米尔福德 ( ) 应用优势 简介 ■■ 获取补充质谱数据，使用MassLynx®软件 蛋白类治疗药物是一类快速发展的药物。由于它们的生产工艺复杂，在开发 中的MaxEnt™去卷积算法进行亚基分析 和生产过程中，我们需要通过各种检测手段来监测其关键品质属性(CQA)， 以确保产品质量和安全性。蛋白质糖基化修饰已成为一项重要的品质属性， ■■ 对亚基数据进行常规监测可及时检测生产 过程中的变化，从而更有效地节省成本 因为研究表明半乳糖基化修饰与某些市售重组单克隆抗体(mAb)的细胞毒性有 关1 。相关分析方法包括基于荧光和 技术的释放 标记技术，以及分别用于 MS - ■■ 进行亚基糖型分析，以快速筛查批次间一 监测单个游离寡糖或糖蛋白的“自下而上”方法。此外，还可采用“自中而 致性 下”策略来评估mAb亚基的主要糖型。后一种方法在生产环境中尤其有用， 在这种环境下，该方法能够以经济有效的方式及时报告糖基化分布的变化并 进行纠正。 ACQUITY QDa质谱检测器是一款经济有效的工具，可用作正交检测技术，为 现有 工作流程增加获取质谱数据的功能。本研究旨在评估将 LC ACQUITY QDa 质谱检测器应用于亚基分析的适用性。曲妥珠单抗是一种 抗体，可以被 IgG1 二硫苏糖醇 还原为大约 的轻链和大约 的重链肽段 图 。 (DTT) 25 kDa 50 kDa ( 1A) 采用MassLynx软件进行数据采集，能够通过MaxEnt1去卷积算法解析复杂的 谱图，以便测定各个亚基的分子量。 酶解和还原可产生三种肽段，每种 IdeS 肽段约 图 。由于 酶解会使得抗体铰链区的单个位点处发生专 25 kDa( 1B) IdeS 属性的高效裂解，因此它成为了治疗性mAb的常用表征工具之一，而在本例 中，我们将其作为监测主要糖型的一种替代方法。 沃特世解决方案 ACQUITY UPLC® H-Class系统