王子旭-中国农业大学动物医学院.DOC

中国农业大学 本科生“URP”立项申请书 项目名称 申 请 人 王子旭 工作单位 动物医学院 联系电话 电子信箱 @163.com 填表日期 201.4.14 中国农业大学教务处制 项目名称 项目起止时间 201-2018 项目申请人情况 姓名 王子旭 性别 女 出生日期 19 最后学历与学位 硕士 专业技术职务 高级实验师 从事专业 基础兽医学 二、实施计划及方案(明确各个环节对培养学生创新能力的具体思路及考核办法) 1. 201.5-2017.9：熟悉实验室环境，摸索实验方法，查阅国内外参考文献，进行理论知识巩固提高。提交一篇综述性文章。翻译一篇与本项目相关的外文文献。培养学生的专业外语能力。 2. 201.9-2018.4：进行实验内容。培养学生扎实的常规石蜡切片方法，染色技术。 （1）实验动物的饲养：培养学生的准备工作能力，包括鼠的饲养方法和鼠的解剖结构认知。 50ICR小鼠100只，雄性ICR小鼠30只，于试验动物房中饲养，饲喂鼠全价料，自由采食与饮水（白开水）。光照时间为14h。鼠房内温度保持在22℃。小鼠进入实验动物房适应2天以后，每天下午4点左右开始做阴道涂片，确定发情后进行配种，次日观察雌鼠阴道口是否有阴栓，确定怀孕后将100只小鼠随机分成2组，每组50只（对照组和应激组），立即对实验组小鼠进行制动应激，每天4h，分别在着床后5d、10d时进行取材，各取十二指肠，空肠，回肠和结肠，4%多聚甲醛溶液中固定 石蜡包埋：固定：所取组织在4%多聚甲醛溶液中固定48h以上，0.%生理盐水水洗组织表面的多聚甲醛，修整组织块截取5mm左右肠段，尽量保证横断面平整，用生理盐水冲洗肠腔内容物。 脱水：进入梯度酒精50%、50%、75%、75%、85%、85%、95%、95%，85%酒精过夜，其余各级酒精分别脱水2 h， 100%、100%各20min。 透明：二甲苯和酒精（1:1）和各1 h，二甲苯5 min、二甲苯中根据组织透明程度决定透明时间。 浸蜡：依次浸入蜡（熔点54-56）、蜡（熔点56-58），时间均30 min；蜡（熔点58-60）是包埋蜡，浸蜡30 min后可进行包埋。 切片：进行连续切片，厚5μm，每五张切片取一张。 展片、捞片及烤片：48水温展片，烤片机上37烘干，37温箱放置24 h以上，保存备用。切片脱蜡复水：二甲苯Ⅰ（15min）→ 二甲苯Ⅱ（15min）→ 二甲苯：无水乙醇（1:1）（5min）→ 100%乙醇（5min）→ 95%乙醇（5min）→ 85%乙醇（5min）→ 75%乙醇（5min）→ 50%乙醇（5min）→蒸馏水中浸泡（3min）。 染核：在苏木精里染30min（染核），蒸馏水漂洗后在显微镜下观察着色情况，并根据着色时间调整苏木精染色时间。着色良好的情况下，用1%盐酸酒精分色10s，脱去染在细胞质上的颜色，分色后观察核呈通透的肉红色即可。 蓝化：用流动自来水蓝化30min，镜下观察。 脱水：50%乙醇（3min）→75%乙醇（3min）→85%乙醇（3min）。 染细胞质：伊红染细胞质5-10 s。 继续脱水：95%乙醇Ⅰ（2min）→95%乙醇Ⅱ（2min）→100%乙醇（5min）→二甲苯：无水乙醇（1:11）（5min）→二甲苯Ⅰ（5min）→二甲苯Ⅱ（5min）。 封片：用中性树胶封片，通风橱中晾干。光镜下观察小肠上皮内淋巴细胞的形态分布，每只动物段小肠取5张切片，每张切片中选取5根结构完整且最长的肠绒毛，统计每一百个上皮细胞中分布的上皮内淋巴细胞的数量。试验记录数据均使用SPSS 11.5统计软件分析，One-Way ANOVA 分析差异显著性，P﹤0.05为差异显著，存在统计学意义，统计结果采用平均数±标准差表示。 （3）对结果进行总结，整理，提交一份数据完整的实验报告。培养学生的分析问题、解决问题和写作能力。 3. 201.4-2018.6：总结实验，分析数据。不仅提升学生组织学染色技术，而且让学生书写一篇高水平的研究性实验报告。 通过以上几个阶段锻炼，培养学生扎实的实验室组织学技术，初步的科研工作能力，严谨、踏实的科研态度，并且具有一定的文字写作能力。 三、项目实施的基础和条件 1.工作基础 本课题组长期从事黏膜免疫的研究，具有扎实的理论基础，获得了丰富的实验经验，掌握了一套成熟的实验方法，配备了完备的实验仪器。 2.实验室条件 本项目依托中国农业大学动物医学院，国家“211工程”重点建设实验室。本单位已具有完善的实验室条件。 已具备的实验条件：基本实验仪器设备：电子天平，全自动高压灭菌锅，超净工作台，CO2培养箱