疾病的基因诊断.PPT

Fig. S1. Screening for SNP rs4753426 T/C polymorphism by Hae III digestion. Lane M is DNA marker, lane 1, 6, 8, 9, 11 and 15 are mutant genotype CC; lane 2, 4, 7, 10, 12 and 13 are heterozygous genotype TC; while lane 3 and 5 represent wild genotype TT. * FDA:食品与药物管理局 SDA：国家药品监督管理局 ADA催化A和dA脱氨生产次黄嘌呤核苷和脱氧次黄嘌呤核苷。ADA缺乏导致A和dA堆积，ATP和dATP增多。dATP可以抑制DNA复制和修复，dA对淋巴细胞毒性强。85%的ADA伴有SCID。 ■基因重排的检测 某一基因从一条染色体的正常位置转移到其他染色体的某个位置称为基因易位或重排。 FISH 已知重排基因和重排位点的序列，PCR * ■基因扩增的检测 在某些类型的肿瘤，癌基因的拷贝数增加，可以从几十到几千不等，称为基因扩增。 酶切-Southern印迹分析。 * ■DNA多态性的检测 限制性片段长度多态性（RFLP）的检测 串联重复序列多态性的检测 - 数量可变的串联重复序列（VNTR） 小卫星DNA：6-70bp；微卫星DNA：1-6bp； 短串联重复序列：3-6bp - 微卫星重复序列的增加或丢失称为微卫星不稳定性。 - PCR * ■基因表达异常的检测 1. mRNA的相对定量分析 - 点杂交或狭线杂交； - RT-PCR法 2. mRNA的绝对定量分析 - RT-PCR/竞争性PCR 3. mRNA的长度分析 - Northern印迹杂交法, RT-PCR 测序 * ■病原体基因的检测 生物学 免疫学和血清学方法 PCR技术 （细菌、病毒、支原体等病原体基因的检测） * 幽门螺杆菌与胃溃疡； 阮病毒与克-雅病及疯牛病。 人类基因组中8%的序列来自病毒。 Nature 463, 84-87 (7 January 2010) 疾病的基因诊断 ■ 遗传病的基因诊断 1. 血红蛋白病 异常血红蛋白病 Hb D Punjab，β 121 GAA (Glu) CAA (Gln)； Normal: 40 + 104bp; Abnormal: 144bp * EcoR I (GAATTC) 2. α地中海贫血 缺失1个α基因：静止型或α+地中海贫血； 缺失2个α基因：标准型或α0地中海贫血； 缺失3个α基因：血红蛋白H病； 缺失4个α基因：血红蛋白Bart’s胎儿水肿综合征。 (2) 珠蛋白mRNA水平 * PCR RT-PCR 3. β地中海贫血 PCR/ASOH, RT-PCR ■基因诊断在法医学上的应用 人体细胞有总数约为30亿个碱基对的DNA，人与人之间不同的碱基对数目达几百万之多。 “DNA指纹”，就是把DNA作为像指纹那样的独特特征来识别不同的人。由于DNA是遗传物质，因此通过DNA鉴定还可判断两人之间的亲缘关系。 　　DNA鉴定技术是英国遗传学家A·J·杰弗里斯（1950－）在1984年发明的。由于人体各部位的细胞都有相同的DNA，因此可以通过检查血迹、毛发、唾液等判明身分。 * ??????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????? DNA指纹 犯罪现场留下的任何与身体有关的东西，如血迹、毛发，就可以根据这些蛛丝马迹将其擒获，准确率非常高。DNA鉴定技术在破获强奸和暴力犯罪时特别有效，因为在此类案件中，罪犯很容易留下包含DNA信息的罪证。 　　根据DNA指纹破案虽然准确率高，但也有可能出错，因为两个人的DNA指纹在测试的区域内有完全吻合的可能。因此在2000年英国将DNA指纹测试扩展到10个区域，使偶然吻合的危险几率降到十亿分之一。 * 基因治疗，指把基因导入人体的细胞，使其发挥生物学效应，从而达到治疗疾病目的的技术方法。 疾病的基因治疗 * 目前的基因疗法是先从患者身上取出一些细胞（如造血干细胞、纤维干细胞、肝细胞、癌细胞等），然后利用病毒当载体，把正常的基因转到病毒上，再用这些病毒去感染取出的人体细胞，让它们把正常基因插进细胞的染色体中，使人体细胞就可以“获得”正常的基因，以