张苗 高速逆流色谱原理及应用.pptVIP

高速逆流色谱 The high-speed countercurrent chromatography (HSCCC) 班级：工业分析01 主讲人：余俊 同组者：汪雅洁 王星 杨云 张茜 摘要 摘要：高速逆流色谱是近年发展起来的，不使用固定相载体的新型液液逆流色谱。本文介绍了高速逆流色谱的工作原理，HSCCC在的分离方面具有很大的优势，具有非常广阔的应用前景。本文主要综述了HSCCC在天然产物、生物医药和其他方面的应用情况。 高速逆流色谱的发展 高速逆流色谱(HSCCC)是在1982年，美国国立卫生院的一个教授首先研究和发展起来的一种不同于传统液相色谱法的现代色谱分离制备技术。作为一种新的色谱技术，HSCCC分离系统可以理解为以螺旋管式离心分离仪代替HPLC的柱色谱系统。HSCCC不使用固相载体作固定相, 克服了固相载体带来的样品吸附、损失、污染和峰形拖尾等缺点。由于不需要固定相，HSCCC技术具有进样量大、无不可逆吸附等优于其他色谱技术的优点，此项技术已经被广泛地应用于医药、环境、化工等领域。 DCCC（液滴逆流色谱） 一、高速逆流色谱原理 K ＝ Cs/Cm 高速逆流色谱工作方法 一、溶剂体系的准备 二、柱系统的准备 三、样品溶液的准备和进样 四、洗脱方式 五、检测 溶剂体系的选择原则 ⑴不造成样品的分解与变性，且不与之发生反应； ⑵对样品有足够高的溶解度； ⑶样品在溶剂体系中有合适的分配系数值(K应在0.5-2之间)； ⑷溶剂体系的各组分应分成体积比例适合的两相, 以免浪费溶剂； ⑸固定相能实现足够高的保留，且要满足一定的要求(保留值越大峰形越好)。因而准确测定待分离组分在两相中的分配系数，便可选择出合适的溶剂系统。 溶剂体系和溶剂系统 溶剂体系选择 选取一个合适的溶剂体系步骤：(1) 通过TLC或者HPLC预测被分离物质的极性。(2) 根据极性选择合适的分离体系。(3) 如果得知与被分离物质极性相似物质的分离体系，可以借鉴。在选择溶剂系统时就需要测定组分的分配系数, 而分配系数测定常采用高效液相色谱法或薄层色谱法，这两种方法都能够较准确地测出特定组分的分配系数值。HPLC法是将适量的样品分别溶于已平衡的两相溶剂，待分配平衡后，进行HPLC的测定，通过得到的色谱峰面积可精确计算出样品在两相间的分配系数。薄层色谱法则是利用样品在等体积上下相中分配平衡后用薄层色谱展开, 通过薄层色谱得到的斑点判断组分的分配情况。不同的体系，有着不同的平衡时间(不同溶剂系统中，从两相溶剂系统的上相与下相溶剂混合时，直到两相系统达到完全分层的时间)，其影响着系统的分离效能，与固定相的保留率密切相关。 逆流色谱与传统色谱的比较 相对柱层析 分离效率高，实验周期短 封闭性操作，无溶剂挥发造成污染 简化繁琐的实验步骤 工艺重复性高 无死吸附，回收率高 二、高速逆流色谱优点 三、影响因素 四、HSCCC 的最新发展 近年来，分析型HSCCC 的柱系统向微型化发展。 螺旋管体积可达3~5 mL，柱子内径可以小到0.3~0.4 mm[23]。基于常规的HSCCC 技术的完善，多种HSCCC 技术也得到了发展。 如pH-区带精制逆流色谱(pH-zone-refining CCC)，HSCCC 与质谱(MS)联用等 1 高速逆流色谱-质谱（HSCCC/MS）联用 基于高效液相色谱（HPLC）和质谱（MS）联用技术的日益成熟，发展了HSCCC 与MS 联用技术。这种联用技术的发展解决了HSCCC 由于固定相的流失而使得流出液乳化，导致检测器的灵敏度降低和峰形变宽的问题。 Oka 设计了T 型连接器，解决了HSCCC 与MS 的接口问题，发现联用技术不影响HSCCC 的分离和质谱的分析，而且适用于极性范围较宽的被分析物。Rinehart 等首次报道HSCCC 与电喷雾质谱(ESIMS)联用技术，ESIMS 作为一种可以连续检测的分析检测器，有很高的灵敏度，它可以利用软电离技术克服离