大肠杆菌ⅰ型菌毛基因的克隆、表达及呈现表达载体的构建（部分内容）.ppt

大肠杆菌Ⅰ型菌毛基因的 克隆﹑表达及呈现表达载体的构建 （部分内容） 学生：王国相 导师：戴鼎震 秦爱建 Ⅰ型菌毛基因结构图 B E A I C D F G H Ⅰ型菌毛呈现表达载体结构模式图 片段BEA PCR扩增图 1 2 3 片段IC,D PCR扩增 片段D’ ，FGH PCR扩增 SOE PCR 扩增片段DFGH 质粒pBEA的构建 质粒pBEA酶切鉴定 1 2 3 4 5 片段IC，D的T/A克隆 质粒pBC的构建 质粒pBD的构建 质粒pBC,pBD酶切鉴定 1 2 3 4 5 pBH的构建 pBH酶切鉴定 SDS电泳 1 2 3 4 5 * * P1 P2 P3 P4 P5 P6 P7 P8 P9 引物P1,P2扩增片段BEA 引物P3,P4扩增片段IC 引物P5,P6扩增片段D 引物P5,P7扩增片段D’ 引物P8,P9扩增片段FGH 引物P5,P9用于SOE PCR，扩增片段DFGH Regulation Major subunit Export Chaperone Usher Minor subunits Number regulator Length regulator Adhesin A B C A, Fimbriated E.coli. B,C, Model for high- and low-valency display of heterologous By type Ⅰfimbriae . Black knobs represent the passenger epitopes. 23130 9416 6557 4361 3300 2320 2027 1，3 片段BEA PCR产物 2 分子量标准λHindⅢ digest 1 2 3 23130 9416 6557 4361 2320 2027 1 分子量标准λHindⅢ digest 2 片段IC PCR扩增产物约2050bp 3 片段D PCR扩增产物约2150bp 1 2 3 23130 9416 6557 4361 2320 2027 1 分子量标准λHindⅢ digest 2 片段D’ PCR扩增产物约2200bp 3 片段FGH PCR扩增产物约2300bp 1 2 bp 5000 4000 3000 2000 1000 1片段DFGH PCR扩增产物约4300bp 2 1Kbp DNA Landder fimB fimE fimA EcoR1 Kpn1 EcoR1+Kpn1双酶切 2027 2322 4361 6557 9416 23130 2670 3300 6000 1,2为pBEA EcoRⅠ+KpnⅠ双酶切图 3,4为pBEA EcoRⅠ单酶切图 5为λ-HindⅢ digest marker 1 2 3 4 1 2 3 bp 23130 9416 6557 4361 2320 2027 bp 6000 5000 4000 3000 2000 1000 1 分子量标准λHindⅢ digest 2,3,4 IC T/A 克隆Kpn1+BamH1双酶切 1 1Kbp DNA Landder 2,3 D T/A克隆BamH1+Sal1双酶切 Kpn1+BamH1双酶切 BamH1+Sal1双酶切 1900 2100 10200 8000 6100 8000 1，pBC BamHⅠ单酶切 2，pBC BamHⅠ+KpnⅠ双酶切 3， λ-HindⅢ digest marker 4， pBD BamHⅠ单酶切 5， pBD BamHⅠ+SalⅠ双酶切 BamH1 fimD fimF fimG fimH Sal1 BamH1+Sal1双酶切