紫草汤治疗过敏性紫癜疗效机制的实验研究 .docVIP

　　紫草汤治疗过敏性紫癜疗效机制的实验研究 【摘要】 目的探讨紫草汤治疗过敏性紫癜的作用机制。方法通过小鼠网状内皮系统吞噬功能实验及被动皮肤过敏反应观察紫草汤对小鼠免疫功能的影响。 结果 （1）紫草汤低、中、高剂量组吞噬指数K和吞噬系数α明显低于生理盐水组,且呈量效关系；（2）紫草汤能使小鼠的胸腺指数降低，且高剂量组与生理盐水组比较有统计意义（P0.05）；但脾脏指数各组间无统计意义；（3）紫草汤各给药组在抑制百分率上也高于生理盐水组，且呈量效关系，但无统计意义。结论紫草汤可能是一个具有抑制免疫功能的方剂，通过抑制免疫、抗过敏、抗变态反应来治疗过敏性紫癜。 【关键词】 紫草汤 过敏性紫癜 疗效机制 实验研究 过敏性紫癜（HSP）是小儿常见的出血性疾病之一，以血液溢于皮肤、黏膜之下，出现淤点淤斑，压之不褪色为其临床特征，常伴鼻衄、齿衄，甚则呕血、便血、尿血。本病属于中医学“血证”范畴，中医古籍中所记载的“葡萄疫”“肌衄”“紫癜风”等病证，与本病有相似之处。HSP近几年发病率呈上升趋势，因感染等原因而易反复发作，但大多预后良好，因有45 ％～65 ％的患儿并发肾脏受累而影响预后。其确切的发病原因及发病机制虽未完全明确，但越来越多的证据显示HSP是一种由免疫复合物介导的自身变态反应。本实验旨在通过小鼠网状内皮系统吞噬功能实验及被动皮肤过敏反应，探讨紫草汤治疗过敏性紫癜的作用机制。 1 实验材料 1.1 实验动物 昆明种小白鼠，体质量18～22 g，雌雄兼用，由中国医科大学实验动物中心提供，许可证号SCXK(辽)2003－0009。 1.2 紫草汤制备 紫草15 g、黄芪15 g、白鲜皮10 g、旱莲草10 g、牡丹皮10 g，用清水浸泡草药30 min，煎煮2次后混合药液，浓缩至24 mL，置冰箱备用。 1.3 抗天花粉血清制备 健康小鼠10只，于两后足掌部分别注射质量浓度为1.2 mg/mL天花粉蛋白注射液0.1 mL，同时皮下注射氢氧化铝凝胶0.1 mL/只。12 d后断头取血，低速离心10 min（3000 r/min），混合抗天花粉血清置冰箱冷冻保存备用。 1.4 试剂与药品 印度墨汁（国药集团化学试剂沈阳有限公司生产，用1 %明胶液稀释4倍供用）、天花粉蛋白注射液（上海市金山制药有限公司生产）、氢氧化铝凝胶（天津市博迪化工有限公司生产）、依文思蓝（国药集团化学试剂沈阳有限公司生产）、丙酮、1 %明胶液、0.1 %Na2CO3。 1.5 实验仪器 UV-1100分光光度计（上海美谱达仪器有限公司生产）、80-2型离心沉淀机（上海手术器械厂提供）、TA100S型电子分析天平（沈阳中特天平仪器有限公司生产）、微量加样器。 2 实验方法 2.1 紫草汤对小鼠网状内皮系统吞噬功能的影响 80只小鼠随机分为4组，即生理盐水组、紫草汤低剂量组、紫草汤中剂量组、紫草汤高剂量组，每组20只。生理盐水组按0.02 mL/g灌服生理盐水，2次/d；紫草汤低、中、高剂量组分别按10 g/（kg·d）、30 g/（kg·d）、100 g/（kg·d）剂量给药，配制成质量浓度为25 ％、75 ％、250 ％的药液，以0.02 mL/g灌服，2次/d。每组连续灌服7 d。第8 d早晨给药后1 h，小鼠尾静脉注入稀释印度墨汁0.01 mL/g，2 min及10 min后，用特制的取血吸管（加样器）从小鼠眼眶后静脉丛取血0.025 mL，分别加入0.1 % Na2CO3溶液2 mL中。以生理盐水组小鼠血0.025 mL溶于2 mL的0.1 % Na2CO3溶液校零，于分光光度计675 nm处比色。称量小鼠体质量，处死后摘除胸腺、脾脏，分别称重，计算吞噬指数K、吞噬系数α及胸腺和脾脏指数。 2.2 紫草汤对小鼠被动皮肤过敏反应的影响 64只小鼠随机分为4组，即生理盐水组、紫草汤低剂量组、紫草汤中剂量组、紫草汤高剂量组，每组16只。给药剂量与方法同2.1。给药第5 d，每只小鼠腹壁两处皮下一次性注射抗天花粉血清稀释液。（抗天花粉血清∶生理盐水=1∶5，每处0.03 mL）。致敏后48 h，各组小鼠按20 mL/kg尾静脉注射天花粉—伊文思蓝蛋白注射液，30 min后脱颈处死小鼠，将腹部皮肤蓝斑皮片剪下，剪碎，加入丙酮—生理盐水（7∶3）混合溶液5 mL中，浸泡，次日离心（3000 r/min），以丙酮—生理盐水为参照，在比色测定仪610 nm处测光密度，取两组的光密度平均值，计算出抑制百分率。 2.3 统计学处理 所有数据采用（±s）表示，组间比较采用t检验。 3 结果 3.1 紫草汤对小鼠网状内皮系统吞噬功能的影响 3.1.1 紫草汤对各组吞噬指数K及吞噬系数α的影响 结果见表1。实验结果显示：紫草汤低、中