专题基因工程的基本操作程序.ppt

学车问答 学车问题回答 [例2]　右图为某种质粒表达载体简图， 小箭头所指分别为限制性核酸内切酶EcoRⅠ、 BamHⅠ的酶切位点，ampr为青霉素抗性基 因，tetr为四环素抗性基因，P为启动子，T为 终止子，ori为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括 EcoRⅠ、BamHⅠ在内的多种酶的酶切位点。 据图回答： (1)将含有目的基因的DNA与质粒分别用EcoRⅠ酶切，酶切产物用DNA连接酶进行连接后，其中由两个DNA片段之间连接形成的产物有________________、________________、__________________三种。 (2)用上述3种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转化实验。之后将这些宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物有________________；若接种到含青霉素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物有____________。 (3)目的基因表达时，RNA聚合酶识别和结合的位点是________，其合成的产物是________。 (4)在上述实验中，为了防止目的基因和质粒在酶切后产生的末端发生任意连接，酶切时应选用的酶是________________。 [思路点拨] [精讲精析]　(1)将含有目的基因的DNA与质粒分别用EcoRⅠ酶切，所产生的黏性末端相同，用DNA连接酶处理后，不同的片段随机结合，可形成3种不同的连接物：目的基因—目的基因、目的基因—运载体、运载体—运载体。 (2)在上述三种产物中，插入目的基因的都不能在四环素培养基上生长，只有运载体—运载体连接产物才能在含四环素的培养基上生长。 (3)启动子是RNA聚合酶识别和结合的位点，可启动转录过程，合成mRNA。 (4)由图示和题目中提供的信息可知，同时运用EcoRⅠ 和BamHⅠ进行酶切可有效防止酶切后产生的末端发生任意 连接。 [答案]　(1)目的基因—载体连接物　载体—载体连接物　目的基因—目的基因连接物 (2)载体—载体连接物　目的基因—载体连接物、载体—载体连接物 (3)启动子　mRNA (4)EcoRⅠ和BamHⅠ (1)切割目的基因和运载体时并非只能用一种酶，但无论用几种酶，一般都用相同种类的酶切割目的基因和运载体。 (2)启动子≠起始密码，终止子≠终止密码。 启动子和终止子位于基因结构的非编码区，起始密码和终止密码位于mRNA上。 [例3]　农杆菌是一种在土壤中生活的微生物，能在自然条件下感染植物，因而在植物基因工程中得到了广泛的运用。下面是农杆菌转化法的示意图，试回答下列问题： (1)一般情况下农杆菌不能感染的植物是________，利用农杆菌自然条件下感染植物的特点，能实现____________________________________。具体原理是在农杆菌的Ti质粒存在T-DNA片段，它具有可转移到受体细胞并整合到受体细胞的________上的特点，因此只要将携带外源基因的DNA片段插入到________(部位)即可。 (2)根据T-DNA这一转移特点，猜测该DNA片段上可能含有控制____________________(酶)合成的基因。 (3)图中c过程中，能促进农杆菌移向植物细胞的物质是________类化合物。 (4)植物基因工程中将目的基因导入受体细胞的方法除了农杆菌转化法之外，还可采取的方法是_______。(至少写出两种) [思路点拨] [精讲精析]　(1)一般农杆菌不能感染的植物是单子叶植物，可感染双子叶植物和裸子植物，利用其感染性，可实现将目的基因导入植物细胞。这里需要特别明确的是真正可转移到受体细胞并整合到受体细胞的染色体上的是农杆菌质粒上的T-DNA片段，因此目的基因必须插入到该部位才能导入成功。 (2)根据T-DNA这一转移特点，可以推测出DNA片段上能控制合成DNA连接酶、限制酶才能实现与双子叶植物细胞染色体DNA的整合。 (3)植物细胞受伤后可产生酚类化合物，促进农杆菌向植物细胞转移。 (4)植物基因工程中将目的基因导入受体细胞的方法除了农杆菌转化法之外，还有基因枪法和花粉管通道法。 [答案]　(1)单子叶植物　将目的基因导入到植物细胞　染色体DNA　T