专题五DNA的粗提取与鉴定.ppt

1.通过尝试对植物或动物组织中的DNA进行粗提取，了解DNA的物理化学性质。 2.理解DNA粗提取与鉴定的原理。 一、基础知识 1.提取DNA的方法： （1）DNA的溶解性： 【思考1】DNA在氯化钠溶液中的溶解度有什么特点？对此有什么应用？ 【思考2】利用什么原理可以来将DNA与蛋白质进一步分离开？ （2）DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性： 蛋白酶能水解 ，但对 没有影响； 大多数蛋白质不能忍受 ℃的高温，而DNA在 ℃以上才会变性。 能够瓦解细胞膜，但对DNA没有影响。 （3）DNA的鉴定： 如何鉴定DNA？ （二）破碎细胞，获取含DNA的滤液 1.必修一学习的质壁分离，你还记得方法和原理吗? 2.鸡血细胞溶液： （1）溶解细胞核内的DNA 在浓度较高的NaCl溶液中核蛋白容易解聚，游离出的DNA溶解在溶液中。 方法：在溶液中加入两倍体积的浓度为2 mol/L的NaCl溶 液，搅拌1 min。注意应沿一个方向搅拌③，使DNA充分溶解。 （2） DNA的析出 加蒸馏水降低NaCl溶液浓度，使DNA析出。 方法：实验中应该缓慢贴壁加入蒸馏水②，并轻轻地沿一个方向不停地均匀搅拌④，以利于DNA分子的附着和缠绕。同时应注意控制加水量，使NaCl溶液的终浓度为0.1～0.2 mol/L。加水过程一般分三次进行，当总加水量为300 mL左右时，DNA已基本析出。加水太多、溶液过稀，会使DNA分子又重新溶解。 用3～4层纱布对DNA稀释液进行过滤②，滤去蛋白质，收集DNA的黏稠物。如果采用离心法，效果更好。用4 000 r/min转速的离心机，离心15 min，除去上清液(含有蛋白质)，留下的沉淀物中含有DNA。此时注意观察DNA黏稠物的颜色。 （3）将DNA黏稠物再溶解， 思考：方案二与方案三的原理有什么不同？ 方案二利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的DNA与蛋白质分开 方案三利用的是DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与DNA分离 思考：为什么加入预冷的酒精？ DNA的鉴定 真题练习 （2012.18）下列关于“DNA粗提取与鉴定实验”的叙述，正确的是 A．洗涤剂能瓦解细胞膜并增加DNA在NaCl溶液中的溶解度 B．将DNA丝状物放入二苯胺试剂中沸水浴后冷却变蓝 C．常温下菜花匀浆中有些酶类会影响DNA的提取 D．用玻棒缓慢搅拌滤液会导致DNA获得量减少 （2011.19）在利用鸡血进行“DNA的粗提取与鉴定”的实验中，相关叙述正确的是 A．用蒸馏水将NaCl溶液浓度调至0.14 mol/L，滤去析出物 B．调节NaCl溶液浓度或加入木瓜蛋白酶，都可以去除部分杂质 C．将丝状物溶解在2 mol/L NaCl溶液中，加入二苯胺试剂即呈蓝色 D．用菜花替代鸡血作为实验材料，其实验操作步骤相同 （2010.32）．(7分)某生物兴趣小组开展DNA粗提取的相关探究活动。具体步骤如下： 材料处理：称取新鲜的花菜、辣椒和蒜黄各2份．每份l0 g。剪碎后分成两组，一组置于20℃、另一组置于一20℃条件下保存24 h。 DNA粗提取： 第一步：将上述材料分别放人研钵中，各加入l5 mL研磨液，充分研磨。用两层纱布过滤．取滤液备用。 第二步：先向6只小烧杯中分别注人10mL滤液，再加人20 mL体积分数为95％的冷酒精溶液，然后用玻璃棒缓缓地向一个方向搅拌，使絮状物缠绕在玻璃棒上。 第三步：取6支试管，分别加入等量的2mol／L NaCl溶液溶解上述絮状物。 DNA检测：在上述试管中各加入4 mL二苯胺试剂。混合均匀后，置于沸水中加热5 min，待试管冷却后比较溶液的颜色深浅,结果如下表。 分析上述实验过程，回答下列问题： (1)该探究性实验课题名称是 ▲ 。 (2)第二步中”缓缓地”搅拌，这是为了减少 ▲ 。 (3)根据实验结果，得出结论并分析。 ①结论1：与20℃相比，相同实验材料在-20℃条件下保存，DNA的提取量较多。 结论2： ▲ 。 ②针对结论I．请提出合理的解释： ▲ 。 (4)氯仿密度大于水，能使蛋白质变性沉淀，与水和DNA均不相溶，且对DNA影响极小。为了进一步提高DNA纯度，依据氯仿的特性．在DNA粗提取第三步的基础上继续操作的步骤是： ▲ 。然后用体积分数为95％的冷酒精溶液使DNA析出。 * 5.1 DNA的粗提取与鉴定 课题目标(B) DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反 DNA不溶于酒精溶液，但细胞中某些蛋白质 则溶于酒精。将DNA与蛋白质进一步分离。 沸