阿魏酸钠抑制高糖诱导的系膜细胞增殖论文.docVIP

　　阿魏酸钠抑制高糖诱导的系膜细胞增殖论文 石明隽 罗华 肖瑛 桂华珍 郭兵 张国忠 【摘要】 目的 探讨阿魏酸钠(SF)对高糖诱导的原代培养系膜细胞(GMC)增殖的作用及其机制。方法 原代培养肾小球系膜细胞，分为正常组、甘露醇组、高糖组、高糖加不同浓度SF组，分别于处理后24、48 h收集细胞。用MTT法检测细胞增殖；流式细胞术测定cyclinD1和细胞周期；免疫细胞化学检测p53蛋白的表达。结果 48 h内，高糖促进GMC增殖，使GMC由G1期进入S期细胞比例增高；同时cyclinD1蛋白表达上调而p53蛋白的表达减少；SF能明显对抗高糖的这种作用，其作用随SF浓度的增加、作用时间的延长而加强。结论 SF可能通过抑制cyclinD1蛋白表达和促进p53蛋白生成，从而抑制高糖诱导的GMC增殖。 【关键词】 系膜细胞；高葡萄糖；阿魏酸钠；细胞周期；cyclinD1； p53 【Abstract】 Objective To investigate the effects and mechanism of sodium ferulate (SF)on the proliferation of mesangial cells induced by high glucose. Methods The primary glomerular mesangial cells al, mannitol, high gloucose and high gloucose plus different concentration SF groups. Cells easured by MTT assay, and cell cycle and cyclinD1 easured through floetry. p53 protein expression munocytochemistry. Results High glucose significantly promoted mesangial cell proliferation and upregulated the expression of cyclinD1,.freelesangial cell proliferation induced by high glucose edepended manner.Conclusions SF can inhibit proliferation of mesangial cells induced by high glucose by suppressing the cyclinD1 expression and increasing the level of p53 protein possibly. 【Key ferulate; CyclinD1; p53 糖尿病肾病(DN)的发病机制十分复杂，至今尚未完全阐明.freela公司)；胎牛血清(FCS，Hyclone)；抗cyclinD1抗体、p53抗体、SABC试剂盒(武汉博士德)。CO2孵箱(美国REVCO)；倒置显微镜(OLYMPUS)；酶标仪(美国BioRad)；流式细胞仪(美国BD)；CM2000B型生物医学图象分析系统(北航)。 1.2 方法 1.2.1 大鼠原代GMC培养 大鼠双肾灌洗后，分级筛网滤过分离肾小球，并用Ⅳ型胶原酶消化处理，种植法体外培养大鼠肾小球系膜细胞。培养细胞按已建立的方法鉴定〔7〕，确定为系膜细胞，供实验用。 1.2.2 实验分组 正常组(5.5 mmol/L D葡萄糖)；SF+正常组(SF240 mg/L＋5.5 mmol/L D葡萄糖)；甘露醇组(5.5 mmol/L D葡萄糖+24.5 mmol/L甘露醇)；高糖组(30 mmol/L D葡萄糖)；SF+高糖培养组(SF60、120、240 mg/L+30 mmol/L D葡萄糖)。各组分别于培养24和48 h时收集细胞用于检测。 1.2.3 MTT法检测系膜细胞增殖 将原代GMC分组，每组三复孔，细胞周期同步后， SF作用20 h和44 h，每孔加入MTT(5 mg/ml)20 μl，继续作用4 h，去上清，然后每孔加入DMSO 200 μl，轻微振荡30 min，酶标仪570 nm处测光吸收值(A)。用台盼蓝染色，检测存活细胞数。 1.2.4 流式细胞仪检测肾小球系膜细胞的细胞周期 调整GMC数为5×105个/ml，接种于50 ml培养瓶中，加入适量的含10％FCS的MEM培养基培养，孵育到亚融合状态，改用无血清培养液孵育24 h，使细胞处于相对静止期(G1期)。分别于24和48 h收集制成单细胞悬液，PBS洗涤2次，用PBS调节细胞数为1×106个/ml，分装于