雌激素膜快速效应对人成骨样细胞MG63 OPG mRNA快速表达水平的影响论文.docVIP

　　雌激素膜快速效应对人成骨样细胞MG63 OPG mRNA快速表达水平的影响论文 武兆忠 刘敏 冯鉴强 林伟 邬恒夫 王金玉 李园 【摘要】 目的 探讨17β雌二醇（E2）膜快速效应对人成骨样细胞MG63的OPG mRNA快速表达水平影响。方法 采用RTPCR法分析经E2快速作用后的MG63细胞中OPG mRNA的表达水平。结果 E2膜快速效应能诱导人成骨细胞MG63 OPG mRNA表达水平出现一个快速增高现象，其表达高峰时间为E2作用后的10 min左右，而且这一现象能被G蛋白藕联抑制苏拉明所抑制。结论 而E2诱导的人成骨样细胞MG63中OPG mRNA表达水平的快速增高，可能与雌激素启动了雌激素膜受体介导的G蛋白藕联受体调节的磷脂酶C/腺苷酸环化酶通路有关。 【关键词】 膜快速效应；护骨素；雌激素；人成骨样细胞 【Abstract】 Objective To explore 17βestradiol (E2) membrane rapid effect on the expression of osteoprotegerin (OPG) mRNA in human osteoblastlike MG63.Methods The OPG mRNA expression in MG63 after rapid effect of E2 embrane rapid effect induced the rapid expression of OPG mRNA in MG63, and the peak time inutes after effect, in, a kind of the Gprotein inhibitor. Conclusions The rapid OPG mRNA expression in MG63 induced by E2 may be related embrane estrogen receptor mediated by estrogen. 【Key brane rapid effect; Osteoprotegerin (OPG); Estrogen; Human osteoblastlike cell 雌激素调节骨代谢的作用机制目前还不完全清楚。经典的雌激素效应是雌激素跨越细胞膜后与细胞内特异性受体结合所介导的基因效应。近年来大量研究资料显示，雌激素除了经典的雌激素效应外，推测还存在膜蛋白的雌激素非基因效应。目前国内外对雌激素与膜蛋白结合后所致的特异性效应的研究资料非常有限，仅有内分泌、血管和神经系统方面的研究资料，如：性激素调节精子中的钙离子信号〔1〕、粒细胞〔2〕、成骨细胞〔3〕、血管平滑肌细胞的离子通道〔4.freelembranes estrogen receptor，mER)，以及雌激素膜快速效应是否也参与人成骨细胞护骨素（OPG）表达目前还未见有相关的研究报道。本研究选取人成骨样细胞株MG63进行实验，以验证成骨细胞中是否存在细胞mER，及其对雌激素经mER介导的OPG快速表达水平的影响。 1 材料与方法 1.1 材料 人成骨样细胞株MG63购自美国培养保存中心（ATCC号：CRL1427）。无酚红αMEM购自Hyclone公司；特级胎牛血清（FBS）为天津TBD灏洋生物产品；HistostainSP Kit为TD Science公司产品；苏拉明和E2为sigma公司产品；总RNA提取试剂盒为上海生工产品；一步法RTPCR mRNA Selective PCR Kit Ver.1.1试剂盒为TaKaRa公司产品；硫酸铵、硫酸镍、醋酸、Tris、DAB、H2O2为国产分析纯产品。 1.2 方法 1.2.1 细胞培养 37℃水浴中快速复苏冷存的人成骨样细胞株MG63，缓慢加入3～5 ml无酚红的内含10%FBS的αMEM培养液的25 cm×25 cm培养瓶中，第2天换液1次以除去已经死去而未贴壁的细胞。以后每2 d换液1次，于37℃、5%CO2条件下培养。待细胞生长融合达90%～95%后，用0.25%的胰蛋白酶消化传代。 1.2.2 药物干预 胰酶消化收集细胞，以105细胞数平铺细胞于25 cm×25 cm培养瓶中，加含10%FBS的无酚红αMEM培养液，37℃、5%CO2条件下培养，第2天换液1次以除去已经死去而未贴壁的细胞。以后每2 d换液1次，于37℃、5%CO2条件下培养，待细胞生长融合达90%～95%后进行药物实验。 干预前的细胞准备：一组细胞为E2干预组，在E2干预前用含0.1%牛血清白蛋白的无酚红αMEM培养液培养6 h，然后改用含10-7mol/L E2的0.1%牛血清白蛋白的无酚红αMEM培养液进行药物干预；另