高效液相色谱电喷雾离子阱质谱法推定硫酸依替米星中有关物质的结构论文.docVIP

　　高效液相色谱电喷雾离子阱质谱法推定硫酸依替米星中有关物质的结构论文 袁耀佐 张玫 钱文 张正行 【摘要】 采用高效液相色谱电喷雾离子阱质谱法（HPLCESIITMSn）对硫酸依替米星中有关物质结构进行推定。采用Phenomnex Gemini NX C18色谱柱，以水氨水冰醋酸（96∶3.6∶0.4, V/V）甲醇（70∶30, V/V）为流动相，质谱条件：电喷雾离子源(ESI)，正离子检测模式；离子源温度350 ℃；雾化氮气压力275.8 kPa；干燥氮气流速10 L/min；离子阱质谱检测器，Smart扫描模式，扫描质量范围m/z 100～900。硫酸依替米星样品中共检出18种有关物质，对其中的13种物质的结构进行了推定，其余5种有关物质的结构未进行解析.freelance liquid chromatographyelectrospray ionizationion trapmass spectrometry(HPLCESIITMSn) method for the identification of related substances in etimicin nex Gemini NX C18(150 mm×4.6 mm, 5 μm) column; the mobile phase:moniaglacial acetic acid(96∶3.6∶0.4)methanol(70∶30); floobile phase: 1 mL/min; temperature of ESI ion source: 350 ℃; nebulizing pressure: 275.8 kPa; dry gas floin and the analytes ode. Eighteen related substances in a etimicin sample icin C1a, micronomicin and its three isomers, ticin′s isomers, ticin, tologues of etimicin, and ticin sulfate; High performance liquid chromatographyelectrospray ionization ion trapmass spectrometry; Characterization 1 引 言 依替米星(Etimicin)，又称1N乙基庆大霉素C1a(图1)，是以庆大霉素C1a 为原料，通过络合催化保护氨基、硅烷化保护羟基、缩合还原型N乙基化等一系列反应，在庆大霉素C1a的1N位上引入乙基而得1，具有高效、安全、广谱抗菌、无交叉耐药性等特点2，临床应用主要是硫酸盐， 即硫酸依替米星。 硫酸依替米星及其相关物质测定多见报道，包括微生物检定法3、柱前衍生化高效液相色谱紫外检测法(HPLCUV)4、高效液相色谱蒸发光散射检测法(HPLCELSD)5、高效液相色谱脉冲电化学检测法(HPLCPED)6等，但对硫酸依替米星中有关物质的研究报道极少。刘军等7对依替米星合成过程中的N乙基化产物3″氮乙基庆大霉素C1a和1,3″二氮乙基庆大霉素C1a(图1)进行了分离和鉴定，但该方法工作量大、实验周期长。采用高效液相色谱质谱联用技术(HPLCMS)对氨基糖苷类抗生素中有关物质进行结构推定已有很多报道8～14，对依替米星及其它氨基糖苷类抗生素质谱裂解规律的研究也有相关文献15,16，但采用HPLCMS对硫酸依替米星中有关物质结构推定的报道鲜见。 R1R2R3依替米星 EtimicinC2H5HH小诺霉素 MicronomicinHCH3CH3庆大霉素C1a Gentamycin C1aHHH3″氮乙基庆大霉素C1a3″Nethylgentamycin C1aHHC2H51,.freelycin C1aC2H5HC2H5中间体P1 Intermediate P1CH3COCH3COCH3CO文献9～11中， 氨基糖苷类抗生素HPLCMS分析的流动相均含三氟乙酸或五氟丙酸，由于它们对电喷雾离子化有强抑制作用，检测灵敏度很低。 Li等12～14通过柱后添加丙酸的TFAfix技术17提高了离子化效率，但该技术需要在柱后连接泵系统，操作烦琐。本研究基于文献18，建立了适合于LCMS分析的流动相。从一批有代表性的硫酸依替米星样品中检出18种有关物质，对其中13种物质的结构进行了推定并参考相关文献和合成工艺佐证推定结果的合理性。 2 实验部分 2.1 仪器与试剂 1100 LC /MSD Trap液质联用仪(美国Agilent 公司)。硫酸依替米星(批号