分离以尿素为氮源的微生概要1.ppt

实验2 分离以尿素为氮源的微生物 一、实验目的: 三、设备及用品： (看教材P25) 1．有些细菌含有脲酶，脲酶可以分解尿素， 　 为其生长提供氮源 2．（NH2）2C=O+H2O 2NH3+CO2 3．尿素呈中性，遇酚红显黄色；氨呈碱性遇酚红显紫红色 二、实验原理: (看教材P25) (看教材P26) 四、材料 (看教材P26) 全营养LB固体培养基 尿素固体培养基：以尿素为唯一氮源 土样1g（从有哺乳动物排泄物的地方取得） 脲酶 五、操作步骤： ２．倒平板： ３．制备一定浓度梯度的细菌悬液： 1g土样＋99ml无菌水，振荡，为10-2稀释液，依次制备10-3、10-4、10-5的土壤稀释液。 ４．涂布分离法分离细菌 １．制备无菌的ＬＢ固体培养基和尿素固体培养基 ５．培养，观察菌落数（倒置，37℃恒温培养箱） （无菌，0.1ml，玻璃刮刀） （有尿素培养基怎么灭菌？） 1．哪些土壤中含有这种以尿素为氮源的微生物多？ 2．此实验用到的选择培养基必需含有哪些物质？ 3．可用什么指标认定不同土壤中选择出的微生物对尿素分解 　　能力的高低？ 没硬化，腐殖质丰富的土壤 碳源、尿素、无机盐、水、酚红 培养基红色的深浅 4．用涂布分离法时，每个培养皿中有几个以内的单菌落最合适。 20 ５．此实验设计遵循了什么原则： 重复性原则 对照原则 1．为什么要用琼脂糖代替琼脂配制固体培养基？ 2．有脲酶的细菌在生态稳态上起什么作用？ 琼脂是未被纯化的混合物，内含一定量的含氮化合物，如果用琼脂固化培养基，会为细菌提供一定量的非尿素类氮源，这样会在尿素固体培养上产生大量以非尿素为氮源的细菌，不利于以尿素为氮源的细菌的筛选 如果土壤中有许多尿素，在自然界较高温度下会被水解，水解后的氨使土壤变成碱性，与其他阴离子形成化合物则会使土壤板结。有脲酶的细菌使植物废弃物和动物尸体降解，并利用所形成的氨，有利于自然界的氮循环 教材思考与练习 3．有脲酶的细菌菌落周围为什么有着色的环带出现？ 4．与全营养培养基上的菌落数比较，为什么尿素培养 　 基上只有少数菌落？ 细菌向胞外分泌脲酶，使培养基中的尿素水解，尿素分解后产生氨，氨为碱性，酚红在酸性环境中为黄色，在碱性环境里变为红色。培养基中的酸碱指示剂产生颜色变化，标志着存在脲酶水解尿素的作用，从而证明这一菌株可以以尿素为氮源。红色环状区域的大小代表脲酶活性的强弱和含量的多少。红色区域越大，表明菌株利用尿素的能力越强 能利用尿素的细菌在土壤菌群中只占极少数量。因为人和其他哺乳动物产生的排泄物毕竟是少量的，而且尿素还可以在高温下自然分解，因此，以尿素为氮源的菌群较少 涂布分离 涂布分离 （2012浙江高考自选）17．幽门螺杆菌（Hp）感染是急慢性胃炎和消化性溃疡的主要致病因素。在患者体内采集样本并制成菌液后，进行分离培养。实验基本步骤如下： 请回答： （1）在配制培养基时，要加入尿素和酚红指示剂，这是因为Hp含有? ①??? 它能以尿素作为氮源；若有Hp，则菌落周围会出现 ?②? 色环带。 （2）下列对尿素溶液进行灭菌的最适方法是 ③??? 灭菌。 A．高压蒸汽 B．紫外灯照射 C．70％酒精浸泡 D．过滤 （3）步骤X表示 ?④?? 。在无菌条件下操作时，先将菌液稀释，然后将菌液? ⑤?? 到培养基平面上。菌液稀释的目的是为了获得 ⑥?? 菌落。 （4）在培养时，需将培养皿倒置并放在? ⑦?? 中。若不倒置培养，将导致 ⑧?? 。 （5）临床上用 14C呼气试验检测人体是否感染Hp，其基本原理是Hp能将 14C标记的? ⑨?? 分解为 NH3和14CO2 。 脲酶 红 D 接种 涂布 单 恒温培养箱 无法形成单菌落 尿素