大样本组织芯片构建方法的技术改进.pdfVIP

Chin J Hemorh．2007；1 7(4) 大样本组织芯片构建方法的技术改进 周 强-，樊祥山 ，余惠萍2，孟凡青-，孟 奎-，张东生2 (1．南京大学医学院附属鼓楼医院病理科，江苏南京 210008； 2．东南大学基础医学院病理学与病理生理学系、分子病理研究所，江苏南京 210009) 摘要：目的 构建大样本组纵芯片，并探讨其构建过程和方法的技术改进。方法 筛选12O例乳腺癌根治标本和4O 例乳腺小叶增生或纤维腺癌活检病例，应用纯蜂蜡作为受体蜡块进行组织芯片构建，构建后造当的温度处理，切片后应用 Superfrost⑩Plus显微玻片捞片。结果 技术改进后制符的组织芯片完整性和美观性好。掉片率接近O％。结论 通过严格 供体蜡块筛选、应用纯蜂蜡作为受体蜡块、适当的组织芯片构建后期处理以及应用Super Frost@Plus显微玻片作为组织芯 片载体能够进一步完善组织芯片构建质最。 关键词：组织芯片；构建；技术改进 中图法分类号：R361．2 文献标识码：A 文章编号：1009-881x(2oo7)oa-0660-02 近年来，组织 片(TMA)技术巾于其高通最、大样本、 大小为35mm×27ram×9mm的载体蜡块，用切片机将其表 实验条件一致以及节省试剂等优点受到越来越多的研究人员 而修平备用，载体蜡块最终厚度约6mm。 的重视和应用，在肿瘤学、免疫学、药物学等等领域的科 l-2．3组织微阵列的设计 将160例标本分3组(乳腺癌淋巴结 学研究中发挥了重要作用。在组织芯片制衍过程中，目标 转移阳性组、阴性组以及乳腺小叶增生或纤维腺瘤组)设计成 组织区域的选取、载体蜡块的制衍、组织芯片蜡块的后期 16×10的阵列，采用直径为lmm的组织打孔针，每个组织芯 处理以及切片裱片等关键过程的细节处理都会直接影响到组 问距0．4mm，每组间距为1．4mm。 织芯片的制备质量，同时也是常常 扰研究人员的主要问 1．2．4组织芯片构建及后期处理 在室温27~C下按文献【1陟骤 题，例如组织掉片、组织抗原性或核苷酸的丢失、组织芯 进行组织芯片构建II’31。构建完毕后，将一干净空白玻片置 片的完整性和美观性等等。笔者结合本实验室长期组织芯片 于载体蜡块表而，用透明胶带稍稍用力将载玻片缠绕固定手 构建的经验，将以往组织芯片制衍过程和方法的某些环节进 载体蜡块上，然后将其置于50~C烤箱内(蜡块的载玻片面向下) 行了改进，在组织芯片构建方而取得良好的结果，现特作 5min，取出轻轻均匀用力按压载玻片，将突出于载体蜡块表 一 介绍。 而的组织芯全部压下于载体蜡块表面平齐。然后再次置于5O ℃烤箱内5min，取出置室温下5min后再次置入5O℃烤箱内 1材料与方法 5min，取出后置于37~C温箱内过夜，第2d取出受体蜡块，室 温下放置l5min后置于4~C冰箱内备用。 1．1材料和仪器 选取2002年～2005年南京大学医学院附属 1．2．5切片和裱片取下载体蜡块上的载玻片，置于冷台使载 鼓楼医院病理科乳腺癌手术切除标本120例及乳腺小叶增生 体蜡块硬度增加；然后将蜡块表面修平，连续切片，酒精 和纤维腺瘤手术活检标本40例。浸蜡溶点温度为52％～54℃， 展片，用s1lperFrost Plus显微玻片捞片，48℃烘干，冷却 包埋石蜡{{：f点温度为58℃～60℃，购自江苏太仓皓天 [艺蜡有 至室温后置于4℃冰箱内箭用。 限公刊；galectin等免疫组化试剂购自北京中杉生物公司；蜂 1．2．6 HE染色和免疫组化染色 按常规方法进行HE染色和免 蜡购自上海华灵 复器械厂(复旦大学』二海医学院病理教研室 疫组化染色。 监制)，批号：2006050977，{{：}点范围：65cc～75cc；石蜡切片 机购自德国MICROM；SuperFrost Plus显微玻片购自德国 2 结果 MENZEL—GLASER公刮，规4=各：25mm×75mm×lmm