细胞免疫荧光技术.pptVIP

细胞免疫荧光技术 实验目的 掌握免疫荧光技术的基本原理 熟悉细胞免疫荧光技术的方法 了解在免疫细胞化学技术中如何获得好的实验结果 实验原理 原位检测 抗原抗体特异反应 间接法 间接荧光抗体染色法示意图 抗原 抗体 荧光素标记的抗抗体 激发光 显示荧光 Hela细胞 Vinculin 实验用品 试剂： 固定液：4%PFA 细胞通透：0.2%TritonX 封闭试剂：10%正常山羊血清 一抗：小鼠源抗Vinculin单克隆抗体 二抗:Alexa Fluor555标记的山羊抗小鼠IgG DAPI（4’,6-二脒基-2-苯基吲哚） PBS洗涤缓冲液：PH7.4 材料： Hela细胞 细胞培养皿 仪器： 荧光显微镜 实验步骤 一，细胞制备和细胞固定 将细胞铺在 24孔板中 将细胞培养 至所需密度 加入4%PFA 固定10min 染色 或保存 PBS洗涤 PBS洗涤 实验步骤 二，细胞免疫荧光ICC染色 0.2% TritonX 处理5min 封闭 室温30min 4℃过夜 37℃1-2小时 37℃5-10min 荧光显微镜观察 加入一抗 加入二抗 加入DAPI复染 PBS 洗涤 PBS 洗涤 PBS 洗涤 实验结果 三，观察 ?human HeLa cells 实验中应注意的问题 细胞不要铺的过密:60-70% 防止细胞污染 固定时间不要太长,一