水稻中期染色体和DNA纤维的高效制备技术 - 植物科学学报.PDFVIP

武汉植物学研究 2004，22(4)：364～367 JournalofWuhanBotanicalResearch 水稻中期染色体和DNA纤维的高效制备技术 彭莉莉，赵丽娟，宋运淳，李立家 (武汉大学教育部植物发育生物学重点实验室，武汉 430072) 摘 要：水稻中期染色体和 DNA纤维制备是水稻分子细胞遗传学研究中的关键技术。目前 ，这两个技术还有很多 不足，该研究建立了高效制备水稻中期染色体和DNA纤维的方法。该方法制备的染色体 ，分裂相多、杂质少、背景 清晰、染色体分散且形态好，水稻根尖分生组织细胞的分裂指数高达 25 。植物细胞的细胞壁是制备DNA纤维的 最大障碍，所以必须先提取细胞核 ，然后裂解细胞核释放出DNA纤维。在这个研究中，还建立了一个用刀切法分离 细胞核，进而用SDS裂解核膜，用载玻片拖出DNA来制备水稻DNA纤维的方法。该方法制备的DNA纤维多呈平 行的细线，背景清晰，伸展的程度均匀，适合于原位杂交。 关键词：水稻；中期染色体；DNA纤维；高效制备 中图分类号 ：$511；Q813．4 文献标识码：A 文章编号 ：1000—470X(2004)04—0364—04 TheHighlyEfficientM ethodsforPreparation ofRiceM etaphase ChromosomesandDNA Fibres PENGLi—Li，ZHAO Li—Juan，SONGYun—Chun，LILi—Jia ‘ (KeyLaboratoryofMOE froPlantDevelopmentalBiology，WuhanUniversity，Wuhan 430072．China) Abstract：ThepreparationofmataphasechromosomesandDNA fibresofriceiSthekeytechnique intheresearchofricegenomestructure．Howeverthesetechniquesarestillin deficiencyatpre— sent．Inthisstudy，amethodtopreparemetaphasechromosomeswithhighefficiencywasdeve— lopped in rice． In the chromosome slidesprepared using thismethod。there were massof metaphasecells，lessimpurity，clearbackground，welldispersedchromosomesandwellpresered chromosomemorphologies．ThemitoticindexofrootcellsiSup to25 ．W ealsoestablisheda DNA fibrespreparingmethod．SincecellwalliSamainabstaclein thepreparationofDNA fi— bres，thusnucleiwareisolatedbychoppingfirst，then lysedbySDS toreleaseDNA，andDNA fiberswerepreparedbydrawingDNA usingacoverside．DNA fibrespreparedby thismethod showedequally spreadparallelthreadwith clearbackground，andweresuitableforin situhy— bridizationanalysis．Thehighly efficientmethodsto preparericemetaphasechromosomesand DNA fibreswillsurelyacceleratericegenomemappingandorganizationanalysis． Keywords：Rice；Metaphasechromosomes；DNA fibr