不同类型紫外分光光度计光路示意图 - 湖南大学.ppt

第四讲　紫外可见分光光度法在药物分析中的应用 湖南大学化学化工学院 药物分析教研室 内容提要 UV法的优缺点 UV-Vis分光光度法的结构及性能 UV法在药物分析中的应用实例 UV法的注意事项 紫外可见分光光度法的优缺点 优点 仪器价格便宜 测定快速、简便 缺点 抗干扰能力弱，不能测量复杂物质 没有紫外－可见吸收的物质无法用此法测定，如：氨基糖苷类 定量只能在一定的范围，相对于HPLC等仪器来说，测定所需的量较大 紫外可见分光光度的结构与性能 紫外可见分光光度计的结构与性能决定了其用途。 了解仪器的结构才能更好地维护和使用 紫外-可见分光光度计结构　 单光束的基本结构 单光束光路（Czerny-Turner式光路） 岛津UV2550光路 　　目前紫外分光光度计上使用的光栅一般为凹面闪耀光栅，看上去像一块普通的反光镜，但其加工难度大，价值高。是分光计是最核心的光学部件！ 光栅 光栅是用来分光的。也就是把一束复合光中某一波长的光集中起来，使之成为“纯的”单波长光。 目前所用的光栅通常为闪耀光栅。其光能损失小。 紫外分光光度计上的光栅一般是1200、1800条刻痕/mm。每mm长度上刻痕越多，分辨率越高，仪器越高档。当然，分辨率也与狭缝宽度相关。 此外，在原子吸收分光光度计、电感耦合等离子体发射光谱仪（ICP）上也用到光栅，其光栅要求更高，通常是3600条、4200条刻痕/mm。 光栅的保养 光栅怕灰尘：灰尘的沾污可严重影响刻痕，从而影响分辨率。 如果光栅上沾了灰尘，千万不能用手摸或用其它材料擦拭，一擦就坏！ 有机溶剂、湿气对光栅也有一定的影响。 光栅置强光下，也会产生老化现象（光栅是镀铝的）。因此实验过程中要注意不要长时间让强光照射光栅。 单光束紫外分光光度计的辨别 单光束紫外仪一般有一个拉杆。检测参比池和样品池时，通过拉杆推到合适位置。 样品室只有一个光的通道。 双光束紫外分光光度计的辨别 双光束紫外仪没有拉杆。　 样品室有两个光的通道。 双光束紫外分光光度计如何实现光的分束？ 半反半透镜：一种方法是通过半反半透镜来分束：在一个透镜上镀反光物质（一般是铝），使一半面积反光，一半面积透光。 斩光器：另一种方法是通过斩光器来分束：即一个扇形反光镜通过马达带动，以均匀速度转动。光线遇到扇形镜时，光线被反射；光线没遇到扇形束时，光射直射通过。 半反半透镜 斩光器 杂散光　 杂散光检验步骤 （1）用浓度为10g/L的NaI水溶液，1cm石英吸收池，蒸馏水作参比，于220nm波长处测量溶液的透光率。? （2）用浓度为50g/LNaNO2水溶液，1cm石英吸收池，蒸馏水作参比，于340nm波长处测量溶液的透光率。其透光率应符合下表中的规定（注意：检查杂散光应在校正波长以后进行）。 220nm处的杂散光测试： 　10g/L的NaI 水溶液：特性为：0-258nm 处不透光，而从258nm开始，透光率可立即达到90%以上，并且上升坡度很陡。可检测220nm的杂散光（此处NaI溶液本应不透光，如果有透过的，测为杂散光）。　 340nm 处的杂散光测试： 　　采用50g/L 的NaNO2 水溶液：特性为：0-385nm 处不透光，而从385nm 处开始，透光率可达90%以上，并且上升坡度很陡。可检测340nm的杂散光（此处NaNO2溶液本应不透光，如果有透过的，测为杂散光）。　 用NaNO2检测杂散光图谱 产生杂散光的原因 ??? ① 灰尘沾污光学元件( 如：光栅、棱镜、透镜、反射镜、滤光片等)。??? ② 光学元件被损伤, 或光学元件产生的其他缺陷( 如：光栅、透镜、反射镜、棱镜材料中的气泡等)。??? ③ 准直系统内部或有关隔板边缘的反射。?? ?④ 光学系统屏蔽不好。??? ⑤ 热辐射或荧光引起的二次电子发射。??? ⑥ 狭缝的缺陷。?? ?⑦ 光束孔径不匹配。??? ⑧ 光学系统的像差。??? ⑨ 单色器内壁黑化处理不当。 吸收池　 吸收池可分为石英和玻璃两种村质。二者的区别如下： 吸收池的配对　 如果参比池和样品池的空池的吸光度不一样，将会对结果产生影响。 出厂前一般厂家对吸收池进行了配对。 一般两个池的透光率相差不到1%认为合格。 实验过程中要注意配对使用，不要乱搭配。 选购紫外可见分光光度计的主要指标 单光束还是双光束或比例双光束？价格及性格：双光束 比例双光束 单光束 杂散光：杂散光越小，仪器档次越高。但没必要盲目追求超低杂散光。一般达到杂散光0.02%已经是非常好的仪器了。 软件功能：目前仪器常备的四大功能：单点测量、多点测量、光谱扫描、动力学。再加上数据平滑、导数光谱、光谱叠加等功能。 附件：动力学装置、固体紫外附件等 UV法在药物分析中的应用 UV法在药物分析中的应用主要包括定性和定量分析两类。